hTERTZEB1通路促进结肠癌细上皮间叶转化EMT的分子机制研究.docx

IIIJl IIIJl FlllllJIIrlrUlllllJlPFrllllIJIHlllIJIIJ Y31 1 5906 目 录 缩略词表 ．．1 英文摘要 3 中文摘要 ．．6 论文正文hTERT／ZEBl通路促进结肠癌细胞上皮间叶转化(EMT)的分子机制研究 ．10 第一部分人端粒酶逆转录酶通过非Wnt信号通路促进结肠癌上皮间叶转化的机制 研究 10 第一章前 言 10 第二章人端粒酶逆转录酶对结肠癌细胞上皮间叶化(EMT)的影响 ．．12 2．1 实验材料 ．12 2．2实验方法 ．17 2．3 结 果 ．22 2．4讨 论 28 2．5 小 结 29 第三章人端粒酶逆转录酶通过非Wnt信号通路对结肠癌上皮间叶化的影响．30 3．1 实验材料 ．30 3．2实验方法 ．34 3．3 实验结果 ．38 3．4讨 论 48 3。5 小 结 49 第四章人端粒酶逆转录酶对E．cadherin启动子活性的影响 50 4．1 实验材料 ．50 4．2实验方法 ．52 4．3 实验结果 ．58 4．4讨 论 62 4．5小 结 ．62 第二部分人端粒酶逆转录酶通过ZEB 1促进结肠癌上皮间叶转化的分子机制研究 64 第一章前 言 64 第二章人端粒酶逆转录酶与ZEBl结合的分子机制研究 66 万方数据 2．1实验材料 2．1实验材料 ．66 2．2实验方法 ．70 2．3实验结果 ．75 2．4讨{仑 76 2．5 小 结 ．77 第三章 人端粒酶逆转录酶／ZEB1复合体结合于E．cadherin启动子对E—cadherin 的表达及上皮间叶化的影响 78 3．1 实验材料 ．78 3．2实验方法 ．83 3．3 结 果 ．90 3．4 讨{念 95 3．5 小 结 ．97 第四章人端粒酶逆转录酶／ZEBl复合体对结肠癌细胞生物学行为的影响 98 4．1实验材料 ．99 4．2实验方法 101 4．3结 果 103 4．4讨 论 ．106 4．5小 结 108 全文总结 109 参考文献 1 1 0 文献综述(已发表)．．． 1 16 参考文献 121 攻读博士学位期间发表的论文、申请的基金及专利 ．129 致{射 130 万方数据 第三军医大学博士学位论文缩略词表 第三军医大学博士学位论文 缩略词表 缩略词 英文全称 中文全称 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 DMEM dulbecco’S Modified Eagle Medium Eagle改良培养基 EMT epithelial·to—mesenchymal transition 上皮间叶转化 MET mesenchymal-to-epithelial transition 间叶上皮转化 hTEIUl human telomerase reverse transcriptase 人端粒酶逆转录酶 ZEBl zinc finger E-box—binding protein E盒结合锌指蛋白1 CDHl E．cadherin 钙粘附蛋白E CDH2 N．cadherin 钙粘附蛋白N DMS0 dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 PMSF pHenylmethyl sulfonylfluoride 2．氨基乙酯二苯基硼酸 PAGE polyacrylamide gel electropHoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 PBS pHospHate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 AMP ampicillin 氨苄青霉素 SDS sodium dodecyl sulpHat 十二烷基硫酸钠 TEMED tetramethylethylenediamine 四甲基7,--胺 Licl aluminium chloride 氯化铝 AP ammonium persulfate 过硫酸铵 EDTA 3thylene dominate traacetic acid 乙二胺四乙酸 HE haematoxylin—eosin 苏木素一伊红 kDa kilodalton 千道尔顿 mln minute 分钟 mg milligram 毫克 ml milliliter 毫升 mm millimeter 毫米 万方数据 第三军医大学博士学位论文mIⅢA 第三军医大学博士学位论文 mIⅢA messenger RNA 信使RNA PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 GFP green fluorescent protein， 绿色荧光蛋白 RIPA radio immunoprecipition assay 免疫沉淀细胞裂