细胞工程对第五章.pptVIP

向军俭 向军俭 第五章 细胞融合与单克隆抗体技术 第一节 细胞融合 一、细胞融合的发展简史 二、细胞融合的基本技术 三、融合细胞的筛选 四、细胞融合的应用 五、融合细胞的克隆化 细胞融合是指在离体条件下用人工方法将不同种生物或同种生物的不同类型的细胞通过无性方式融合成一个细胞的技术。 二、细胞融合的基本技术 细胞虽在体外培养条件下会自发融合，但频率极低，故一般均须添加具有诱导细胞融合效应的生物或化学因子(融合剂)，或采用电融合技术，人为地促进细胞融合。 人们把这种可以促进细胞融合，提高融合率而加入的生物试剂或化学试剂叫作细胞融合剂。 1、细胞融合的机理 细胞融合实际上包含多个过程： 首先是两个亲本细胞并列，细胞膜接触，以后膜组织局部破坏，最终形成包围融合细胞的连续胞膜。 融合细胞表面的特征性变化，有膜成分和胞质成分交流以及细胞内电导率的连续性。 病毒融合剂(p82)： 最早被采用病毒融合剂有疱疹病毒、天花病毒和副粘液病毒等在内的病毒类融合剂。 灭活仙台病毒介导细胞融合过程可以大大提高融合频率。它在病毒类融合剂中最为有效，使用最广。 使用仙台病毒诱导细胞融合步骤 制备细胞悬液 紫外线灭活2分钟（使仙台病毒失去致病性，仅起融合因子的作用） 混合亲本细胞（高pH高Ca2+，加入灭活病毒8-10分钟） 杂种细胞的筛选 化学融合剂： ◆ 常用PEG