限定因子诱导胎猪成纤维细胞重编程为多能性细胞-生物化学与生物.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(6): 607~612 限定因子诱导胎猪成纤维细胞重编程 为多能性细胞* 1)** 1,2)** 1) 1) 1) 1) 慧群 曹鸿国 孙雪萍 薛奕杰 张卫琴 黄伟玲 陶 勇1,2) 刘 亚1,2) 李运生1,2) 张运海1,2)*** 章孝荣1,2)*** 1) 2) ( 安徽农业大学动物科技学院，合肥230036 ； 徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，合肥230036) 摘要 尝试运用限定因子融合蛋白建立猪的诱导多能性干细胞 试验采用Oct4 、Sox2 、Klf4 、c-Myc 四种限定因子经慢病毒 表达载体系统介导感染猪胎儿成纤维细胞，对表达外源限定因子的猪胎儿成纤维细胞进行培养传代，逐步分离培养出集落边 缘界限清 的细胞克隆，细胞集落生长状态稳定、核型正常、碱性磷酸酶检测为阳性，免疫细胞化学检测显示，Oct4 、 Nanog、SSEA-1 蛋白表达为阳性，体内能够分化形成含有三个胚层的畸胎瘤 结果证实分离培养的细胞克隆为猪诱导多能性 干细胞，为进一步完善诱导方案和深入研究应用猪诱导多能性干细胞奠定了基础 关键词 猪，诱导多能性干细胞(iPS 细胞)，限定因子融合蛋白 学科分类号 Q813.5，Q291 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00737 [1] 2006 年，Takahashi 等 通过导入外源性限定 因子Oct4、Sox2、c-Myc 、Klf4 使小鼠皮 成纤维 1 材料和方法 细胞成功转变为具有胚胎干细胞(embryonic stem 1.1 定因子慢病毒表达载体的构建 cell，ES 细胞)特性的多能性干细胞，又称诱导多 根据NCBI 上猪Sox2(NM 001123197)、c-Myc 能性干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS 细 (NM 001005154) 、Klf4 (NM 001031782) 基 因的 胞) ，四倍体嵌合技术证实了小鼠iPS 细胞同正常 mRNA 序列，设计合成上、下游引物，引物序列 [2-3] [4-5] [6] 的ES 细胞一样具有全能性 此后，人 、猴 、 如下：pSox2 上游，5 TTTAAGCTTGCCACCAT- [7] 大鼠 等方面相关的iPS 细胞诱导也相继获得成 GTACAACATGATGGAGAC 3 ，下游，5 AAAG- 功 在家畜iPS 细胞诱导方面，2009 年，Esteban GATCCGGCATGTGAGAGAGAGGCAGTGTAC 3 ; [8-10] 等 通过使用病毒载体介导限定因子诱导出猪的 pKlf4 上游，5 TATAAGCTTGCCACCATGGCTG- iPS