分子生物学技术在麻风病防治与研究中的应用.pptVIP

分子生物学技术在麻风病防治与研究中的应用 北京热带医学研究所 翁小满 陈小华 麻风病研究应用方向 早期诊断 疗效判定 鉴别复发与麻风反应 麻风病流行病学研究 耐药菌检测 麻风病易感基因研究 麻风病免疫相关基因研究 早期诊断 PCR检测皮损或皮肤切刮组织液中麻风菌特异性DNA片段, 如编码36、18KDa 蛋白基因、麻风菌重复序列等。 这种病原学检测比皮损或皮肤切刮组织液的抗酸染色更敏感。 疗效判定 RNA水平能反映细菌的活性。麻风菌16S rRNA可鉴别麻风菌与其他分支杆菌，为麻风菌特异性基因片段 MDT前后，采集皮损组织或皮肤切刮组织液， 以RT-PCR定量和半定量检测其中的麻风菌RNA, 如16S rRNA水平的变化来评价疗效。 鉴别复发与麻风反应 鉴定死、活菌，对鉴别复发与麻风反应有帮助。 麻风菌特异性DNA与RNA检测；皮损中TNFa等与麻风反应相关的细胞因子的表达水平 麻风病流行病学研究 以VNTR, SNP为主的麻风菌基因分型， 可了解麻风菌基因分型与地理分布的关系，研究麻风菌的进化；传播链的研究与复发与再感染等流行病学。 鼻腔是麻风菌进入和排出人体的主要途径。检测麻风病患者和接触者鼻腔分泌物麻风菌携带是评价麻风病流行的指标。 耐药菌检测 检测药物作用的靶基因突变，或进一步研究药物基因型与疾病表现型的关系; 了解 DDS ---- fol p RFP------ rpo B1, rpoB2 OFX------- gyrA, gyrB 麻风病易感基因研究 易感基因研究意义 改进宿主抵抗策略 疫苗研究 增加对保护性或致病性生物标记物的认识 检测疫苗和干预治疗的有力工具。 易感基因研究方法 小鼠模型---- 自然抵抗相关的巨噬细胞蛋白1 (natural resistance associated macrophage protein 1，Nramp1) 候选基因---- 人类白细胞抗原(HLA)、TNF-α、维生素D受体（VDR） Toll样受体（TLRs） 全基因扫描方法----帕金森疾病基因PARK2及其共调节基因PACRG SNP 的检测技术 PCR及DNA直接测序 PCR-RFLP； PCR-SSP ( PCR specific primers) ； PCR-SSO(sequence-specific oligonucleotide) 等位基因特异性PCR (allele specific PCR AS-PCR) 、 等位基因特异性寡核苷酸探针杂交. 麻风病免疫相关基因研究 麻风病光谱现象; 与机体对麻风菌的免疫反应不同相关. 麻风病光谱现象及机体免疫反应 麻风病免疫相关基因的检测技术 ELISA; RT-PCR; FACS; 免疫组化等. 分子生物学技术将推动麻风病 各方面研究的进一步发展! * * * *