N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶NAG试剂盒使用说明.docVIP

N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶NAG试剂盒使用说明 　　N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明 　　书 　　(酶法〃液体双试剂) 　　用 途 　　本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。 　　原 理 　　在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响～在第二反应中～NAG作用于基质P-硝 　　基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)～生成 　　N-乙酰氨基葡萄糖～此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成HO。此HO2222在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双 　　?3-双(4-氯酚)甲基-4-?二甲氨苯基?胺(BCMA)反应～生成绿色色素。通过测定此色素可求得NAG的活 　　力。 　　第一反应: HK 　　葡萄糖 + ATP ?????????? 葡萄糖-6- 　　磷酸 + ADP 第二反应: 　　NAG 　　PNP-NAG + HO ??????? N-乙酰氨基葡萄2糖 + p-硝基苯酚 　　NAGOD 　　N-乙酰氨基葡萄糖 + O + HO ???? N-乙酰22氨基葡萄糖酸 + HO 22 POD +HO + BCMA + H ????? 绿色色素 + 2HO 222试 剂 ?????????????????????????????????? 试 剂 成 份 含 量 ?????????????????????????????????? R-1A1(冻干) NAGOD ?3000U/L POD 　　?12500U/L 　　HK ?8000U/L 　　ATP〃2Na ?5mg/ml R-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/L 　　R-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L ????????????????????? 　　????????????? R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/L 　　R-2B MES 　　30mmol/L ?????????????????????????????????? 标准酶 NAG 　　约为50U/L 　　标准酶溶解液 MES 30mmol/L ?????????????????????????????????? 标 本 　　尿液 试剂配制 　　R-1:以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2～再以此溶液溶 　　解一瓶R-1A1。溶解后～低温避光保存(2-8?)可稳定二周。 　　R-2:以一瓶R-2B溶解一瓶R-2A。溶解后～低温 　　避光保存(2-8?)可稳定二周。 标准酶溶液:吸取5.00ml标准酶溶解液溶解一瓶 　　标准酶。 　　测定方法 分析方法:速率A,主波长:750nm,副波长:600nm 　　,可不用,,样品量:4.0ul,R-1:240ul～R-2:120ul, 　　校准方式:线性,反应方向:上升,测定温度:37?。 样品与R-1混匀后反应5分钟～加入R-2混合后 　　延迟157秒～测定125秒。 　　　　样品 4.0ul 主波长750nm 　　R-1 240ul R-2 120ul 　　副波长600nm 　　测光 测光 　　0 5 7 10min 　　计 算 　　ΔAs/min NAG(U/L) = ??????〓标准酶标示值 　　ΔAstd/min 　　ΔAs/min = 测定管的吸光度变化量 ΔAstd/min = 标准管的吸光度变化量 　　计算实例 　　采用日立7020型自动分析仪测得测定管的Δ