乙型病毒性肝炎开的实验室检查.ppt

* 同时可以实现对HCV,HIV-1,衣原体，及淋病的一体化检测 Back 病毒基因突变 疾病进展 临床表现 对干扰素应答 耐药变异 生化学改善 HBeAg血清学转换 HBV DNA清除 急性乙型肝炎 慢性乙型肝炎 肝硬化 (LC) 肝细胞癌 (HCC) * HBV基因型/基因亚型 分型方法 优缺点 序列测定法 最直接，最可信，是HBV基因分型的金标准，但繁琐费时而且价格昂贵，混合型检测能力差，不适于大样本检测。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法 (PCR-RFLP) 较测序法简便，适于大样本检测，但由于需要进行酶切，所以操作仍较为繁琐，成本较高，并存在酶切不彻底等问题。 pre-S2单克隆抗体酶联免疫测定 (mAbs EIA法) 简单、快速，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高并不能有效鉴别有些混合型感染和HBsAg低表达及某些表位表达不充分的标本。 分子探针杂交法 简单、快速，对混合型检测非常敏感，已商品化，适于大样本检测，但检测费用较高而且灵敏度和特异度还有待提高。 型特异性引物PCR法 简单、快速，成本低，具有较高的灵敏度，适于流行病学研究和临床大样本检测。但特异度还有待提高。 常用HBV基因分型方法比较 * B型特异性“引物对”的特异度分析 B型特异性引物HB（正义链）：5’-ACC GTG AAC GCC CAC MGG AA-3’ * Back 4.HBV 临床药物治疗监测 乙肝病毒的耐药性检测，是精准治疗乙肝的关键！！ 目前由于治疗不够规范，造成我国目前超过95%的乙肝患者发生耐药、病毒变异、病毒耐药，变异检测势在必行！ 拉米夫定是第一个被批准治疗慢性乙型肝炎的口服抗病毒药, 已在全世界广泛应用。但其耐药发生率高, 治疗1年时耐药发生率为23%, 2年为46% , 3年为55% , 4和5年分别为65%和71% 。 * 耐药---核苷(酸)类似物 (NA) 治疗失败最重要原因 * 拉米夫定LMV 阿德福韦酯ADV 替比夫定LdT 恩替卡韦ETV HBV 替诺福韦TDV NAs： 抑制病毒复制 长期使用 耐药变异 临床耐药 表型耐药 基因耐药 耐药 研究 * * * Polymerase Terminal protein Spacer Reverse Transcriptase (RT) RNaseH rt1 rt344 逆转录酶 (RT) 区某些位点变异与耐药相关 preS1 preS2 HBsAg s1 s266 可同时分析：耐药变异，HBsAg变异，基因型，血清型 全长RT区分析技术路线 HBV DNA 提取 snPCR扩增RT区 PCR 产物直接测序 生物信息学分析与数据信息挖掘 血清与资料收集 Neg. B C kb 可同时分析：耐药变异，HBsAg变异，基因型，血清型 * 小 结 * 更新了对乙肝两对半结果的认识； Pre-S1的临床价值和应用； HBV DNA检测的临床价值和意义； HBV耐药株和耐药位点筛查方法的建立。 * 报告人：付红伟 Email: frankson5323@126.com * S区：由S、前S1和前S2组成。分别编码构成外衣壳的主蛋白HBsAg、中蛋白preS2+S、大蛋白preS2+ preS1+S。 C和前C编码内衣壳的HBcAg和HBeAg。P区最长，与其他3个区尤其是S区重叠，编码HBV特有的DNA多聚酶，具有逆转录酶活性。 * S蛋白又称主蛋白，是外衣壳的主要成分，每个Dane颗粒表面可有300-400个S蛋白分子。可刺激机体产生中和抗体，可抵抗HBV的再感染。S蛋白是制备疫苗的最主要成分。 PreS2可与多聚人血清白蛋白结合，人肝细胞膜上有多聚人血清白蛋白受体，通过PHSA搭桥，HBV可与肝细胞结合在一起。 preS1位于HBV的最表面，可直接与肝细胞黏附，介导HBV的吸附。preS1、 preS2蛋白免疫原性均较S蛋白更强，刺激机体产生的相应抗体均有中和作用。 * 乙型病毒性肝炎的实验室检查 报告人：付红伟 天津医大总医院 检验中心 2011.1.21 我国HBV感染概况 一般人群HBsAg携带率高达7.18%；现有慢性HBV感染者约9 300万人，占全世界的1/4； 其中慢性乙型病毒性肝炎患者超过 2 000万例，占全世界慢性乙肝患者的1/3； 15岁以下儿童HBsAg携带率下降显著，1-4岁组仅为0.96%；1~ 4岁组HBsAb阳性率由1992年15.75%升至72.25%; 抗HBcAb阳性率由1992年30.08%降至3.76%； * HBV基因组 HBV DNA是由长链L (负链) 和短链S (正链) 组成的不完全双链环状DNA，短链的长度相当于长链的50%～85%。 HBV DNA长链载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框