三种培养原代滑膜成纤维细胞方法比较.PDFVIP

昆明医科大学学报 2016袁37渊 6冤院52耀56 CN53 -1221 R Journal of Kunming Medical University 三种培养原代滑膜成纤维细胞方法的比较 １） １） ２） １） １） １） １） 马 莎 ，林 俊 ，于 亮 ，晋 松 ，李 芹 ，张 虹 ，范宏涛 ， （1）云南省第一人民医院风湿免疫科 云南 昆明 650032；２）中国医学科学院北京协和医学院医学 生物学研究所遗传室，云南 昆明 650118） ］ （ 寻求获得快 ［摘要 目的 比较3种体外分离培养原代类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞 RASFs）的方法， 速有效的培养途径．方法 将来自关节镜RA滑膜切除术的滑膜组织分别采用胶原酶消化法、改良组织块法、双 酶消化法进行培养．采用倒置相差显微镜观察细胞形态及生长特性，以Vimentin组织化学法进行鉴定．台盼兰计 数培养 14d后所得活细胞数目．结果 3种原代分离培养方法均可成功培养出RASFs，符合RASFs的形态特征， Vimentin 阳性细胞＞95%，其中：胶原酶消化培养法分离的RASFs16-20d细胞汇合度可达70%，约 ４周汇合度 95%；改良组织块法分离的RASFs10～14d细胞汇合度可达70%以上；双酶消化法分离的RASFs约 ４周细胞汇 合度达85%．处理相同数量滑膜组织获得活细胞数目比较，改良组织块法组为 （1.60±0.08）×10 个，胶原酶消6 （ 6 （ 6 （ 化法组 1.41±0.08）×10 个，双酶消化法组 1.19±0.05）×10 个，差异有统计学意义 ＜0.05）．培育原代 RASFs细胞所需时间比较，胶原酶消化法需 （267.50±16.58）min，双酶消化法需 （183.75±11.08）min，改良组 织块法需 （149.10±13.71）min，差异有统计学意义 （＜0.05）．结论 改良组织块培养法能最大限度地利用滑 膜组织，获得最多数量原代RASFs细胞，是建立体外RA细胞模型最高效、快捷的方法． ］ ；原代培养；方法；比较 ［关键词 类风湿关节炎；滑膜成纤维细胞 ］ ］ ］ ［中图分类号 R593.22 ［文献标识码 A ［文章编号 2095－610X （2016）06－0052－05 ComparisonofThreeMethodsforCulturingRheumatoid ArthritisSynovialFibroblasts １） １） ２） １） １） １） １） MASha ，LINJun ，YULiang ，JINSong ，LIQin ，ZHANGHong ，FANHong-tao （1）Dept. ofRheumatoid 驭Immunology，The FirstPeople’s Hospital of YunnanProvince，Kunming Yunnnan 650032；2）Dept. ofMedical Genetics，Institute ofMedical Biology，ChineseAcademy ofMedical Sciences andPeking UnionMedica