enu与疾动物模型.pptVIP

所获短尾小鼠属于纵形肢体缺陷，与人类心手综合征（holt-oram syndrome，HOS）属于同一类型，其突变基因与人类TBX5基因高度同源。心手综合征在人类的发病率约为十万分之一。 短尾小鼠无疑是一个很好的骨骼畸形研究的动物模型。 短尾小鼠的模型价值 短尾突变基因（T）的序列鉴定与分析 短尾突变基因序列鉴定与分析技术路线 RT-PCR及巢式PCR 抽提RNA 胶回收测序 测序结果比对 确定突变位点 基因组突变位点鉴定 实 验 方 法 8.5天小鼠胚胎的获取 RNA抽提：参照 RNAR Total RNA Isolation System ( Promega 公司 )的说明书，在超净工作台内进行操作 RT引物设计 逆转录：参照 Invitrogen 公司 SuperScriptTM First-Strand Synthesis System for RT-PCR 试剂盒说明书操作 高保真PCR扩增 PCR产物回收：fastgene 胶回收试剂盒回收。收集滤液,送上海生工测序。 8.5天 B6-St 小鼠胚胎总 RNA RT-PCR扩增产物，得到了 1494 bp 的特异性产物 突变T基因RT-PCR产物电泳图 T基因、突变T基因的cDNA序列与数据库序列的比对 巢式 PCR 验证结果 1：正常小鼠胚胎T基因PCR电泳结果。 2：短尾小鼠胚胎T基因PCR电泳结果。 正常小鼠和突变小鼠的巢式PCR测序结果比对 T基因突变序列对应的基因组序列分析 基因组突变T基因扩增 得到了 361bp 的产物 正常B6和短尾小鼠基因组数据库DNA序列比对 结 果 实验证实了我们所获得的短尾小鼠T基因外显子编码区单碱基的突变（T-A），造成了 mRNA 缺失67个碱基，使T基因编码蛋白功能活性丧失，导致短尾的产生。 经数据库检索，尚未发现有第2外显子由于基因突变导致剪接错误的报道。因此，我们所获得的短尾突变小鼠的突变基因是T 基因的一个新的等位基因。 数量性状基因突变 谢谢大家！敬请批评指正！ * ENU诱变建立人类疾病动物模型是诱发和自发手段的有机结合，两种手段的交互运用，可以加速疾病动物模型的建立 突变基因的微卫星定位体系 D1Mit372、D1Mit84、D1Mit273、D2Mit6、D2Mit17、D2Mit528、D3Mit268、D3Mit15、D4Mit17、D4Mit54、D5Mit352、D5Mit168、D6Mit274、D6Mit339、D7Mit246、D7Mit333、D8Mit4、D8Mit320、D9Mit325、D9Mit243、D10Mit3、D10Mit73、D11Mit163、D11Mit258、D12Mit136、D12Mit17、D13Mit18、D13Mit262、D14Mit50、D14Mit205、D15Mit226、D15Mit34、D16Mit189、D16Mit100、D17Mit33、D17Mit39、D18Mit52、D19Mit128、D19Mit33。 泳道1： 野生型D2品系小鼠对照； 泳道 2－17：F2角膜浑浊小鼠的检测结果，其中第9泳道发生重组，其余连锁。 F2代 B6角膜浑浊小鼠的微卫星检测 角膜浑浊小鼠突变基因的连锁分析 角膜浑浊小鼠突变基因的染色体定位 D17Mit33与D17Mit143聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 上图：第4泳道发生重组 下图：无 1 例发生交换，12、13、14分别为D2、F1、B6 F2代 短尾小鼠的微卫星检测 短尾鼠的突变基因连锁分析 228只F2 [（B6×D2）× D2]? 109只短尾 短尾突变基因与各微卫星的连锁分析 短尾小鼠突变基因的染色体定位 角膜浑浊突变小鼠的生物学特性初步研究 突变品系的建立及其模型性状研究的技术路线 突变杂合子 繁殖学指标 生长发育 血常规 血液生化 免疫学指标 病理组化 建立新的模型品系 形态行为观察 角膜浑浊小鼠 角膜浑浊小鼠和野生型小鼠的繁殖学指标比较 角膜浑浊小鼠后代的性别比(♂:♀)为：1.07 有角膜浑浊表型的性别比(♂:♀)为：1.44 B6-Co与正常B6小鼠的脏器系数 角膜浑浊突变系与正常B6小鼠血常规的比较 角膜浑浊突变系与正常B6小鼠血液生化值的比较 角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（1） 角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（2） 角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（3） 角膜浑浊小鼠的模型价值 我国盲人数约670万人，角膜浑浊是仅次于白内障的主要致盲原因（约占15.4% ）。人类角膜病有多种类型，它们的致病原因更有许多假说