GB/T 14643.5-1993工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定　MPN法.pdf

中华人民共和国国家标准 工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定 GB/T 14643.5一93 MPN法 Industrialcirculatingcoolingwater-Sulfate-reducingbacteria-MPNtest 1主题内容与适用范围 本标准规定了工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定方法。 本标准适用于工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中硫酸盐还 原菌的测定。 2 引用标准 GB603化学试剂 试验方法所用制剂及制品的制备 GB6682分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 本法采用多试管发酵技术，在29士1'C培养21d,如果试管内产生黑色沉淀并伴有硫化氢臭味的表 明阳性反应，采用MPN技术对被测试样中的硫酸盐还原菌进行计数。 4试剂和材料 本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水的规格。 4.1 磷酸氢二钾(HG3-1228); 4.2 氯化钱(GB658); 4.3硫酸钠(GB9853); 4.4 氯化钙; 4.5 硫酸镁(GB671), 4.6 乳酸钠; 4.了酵母汁:生化试剂; 4.9 硫酸亚铁铁(GB661); 4.9 维生素C; 4.10 氯化钠(GB1266); 4.11氢氧化钠(GB629):40g/L溶液; 4.12 盐酸(GB622):1+11溶液; 4.13硫代硫酸钠(GB637); 4.14 乙醇(GB678):751(v/V)溶液; 4.15 牛皮纸; 4.16 医用脱脂棉。 国家技术监督局1993一08一06批准 1994一07一01实施 cs/T 14643.5一93 5 仪器和设备 5.1 无菌箱(室)或超净工作台; 5.2 蒸汽压力灭菌器; 5.3 生化培养箱; 5.4 电热干燥箱:温度可控制在((60 280)士20C; 5.5 电热恒温水浴锅:恒温范围(37^100)士10C; 5.6 刻度吸管:1mL; 5.7 刻度吸管:5mL; 5.8试管:150mmX15mm并配上密封的塞子; 5.9 试管架; 5.10 刻度三角瓶:500mL; 5.11磨口三角瓶:l00mL; 5.12 磨口试剂瓶:1OOOmL; 5.13 容量瓶:1OOOmL, 6 试验前准备 6.1无菌水的制备 将水分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶40mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片来防止粘 连，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎，以防污染，用燕汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min, 6.2 培养基的制备 6.2.1称取下列试剂: 磷酸氢二钾 0.5g; 氯化按 1.Og; 硫酸钠 0.5g; 氯化钙 0.1g; 硫酸镁 2.Og; 乳酸钠 3.5g; 酵母汁 1.Og; 将上述试剂溶解在1OOOmL水中，用氢氧化钠溶液(4.11)或盐酸溶液((4.12)调节pH至7.2士0. 2，并分装在500mL刻度三角瓶中，每瓶不超过350mL，瓶口塞上棉塞，并用牛皮纸包好，用蒸汽压力灭 菌器 121士1℃灭菌15min, 6.2.2硫酸亚铁按溶液:在培养基使用的当夭称取1.2g硫酸亚铁按，在无菌箱(室)内均匀地摊在离紫 外线灯30cm处灭菌30min，在无菌操作下，把硫酸亚铁按溶解于事先准备好的无菌水((6-1)中，混匀。 6.2.3维生素C溶液:在培养基使用的当天称取0.4g维生素C，在无菌箱(室)内均匀地摊在离紫外线 灯30cm处灭菌30min。在无菌操作下，把维生素c溶解于事先准备好的无菌水((6.1)中，混匀。 6.2.4 在无菌操作下，按每100mL培养基(6.2.1)各加入1.OmL硫酸亚铁按溶液((6.2.2)和1.OmL 维生素C溶液((6.2.3), 6.3 无菌稀释水的制备 6.3.，生理盐水的配制:称取s.50g氯化钠溶解在1OOOmL水中，混匀。 6.3.2 将生理盐水(6.3.1)分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插人 一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，