第十五章核酸的研后究方法.pptVIP

第十五章 核酸的研究方法 DNA的分离 RNA的分离 核酸的定量 通常很难分离出完整DNA分子，但可得到分子量不太大的环状DNA，这类制剂包括： 共价闭环DNA：常呈超螺旋型 开环DNA：双链环状DNA的一条链断裂，分子呈松弛态 线型DNA：环状DNA的双链断开 在超速离心机造成的离心力场中，溶液中的核酸下沉的速率会大大加快，这是核酸的沉降特性，该技术可研究： ? 核酸在溶液中的构象 ? 测定核酸的沉降系数和相对分子量 氯化铯密度梯度沉降平衡超离心法 核酸密度测定 测定DNA中G-C之含量 溶液中核酸构象的研究 用于核酸的制备 凝胶电泳兼有分子筛和电泳的双重效果 不纯核酸样品： 琼脂糖凝胶电泳分离出区带 溴化乙锭染色 紫外灯下粗略估计含量 电泳迁移率取决于： 核酸分子大小 胶浓度 DNA的构象 电流 碱基组成 温度 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺作为支持物 孔径小于丙烯酰胺 可分析小于1000bp的DNA片断 PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方