ehec o157h7和空肠弯曲菌基磁珠-lamp检测方法的建立.docxVIP

分类号 分类号 密级 华中农业大学硕士学位论文 EHEC 0157：H7和空肠弯曲菌氨基磁珠．LAMP检测方 法的建立 Development of ASMNPs-LAMP Method for Detection of EHEC 0157：H7 and Campylobacterjejuni 研究生 王雪 学号 2012302110153 指导教师 栗绍文 副教授 指导小组 毕丁仁 教授 李白力 副教授 刘梅 副教授 胡思顺 副教授 孟宪荣 讲师 专业：预防兽医学 研究方向：兽医公共卫生 获得学位名称：农学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学动物医学院 二。一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 不 如需保密，解密时间 年 月 曰 是否儇密 由 翩 f煳必 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究m作及取得的研究 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰霉过的研究成果。也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料。指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中傲了明确的说明。并表示了谢意。 研究生签名： _●、●一|{埋舅 E寸faJ： 20fS年6月f2目 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照 学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索昶阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交 换服务。同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文圆涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密豹 论文)在解密后适用于本授权书。 学位论文作者签名：j-匆 导师签名：絮獬支 签名日期：劲污年6月，2日 签名习期：铷J年乡月∥墨 万方数据 EHEC EHEC 0157：H7和空肠弯曲菌氨基磁珠．LAMP检测方法的建立 目录 摘 要 ．i ABSTRACT 一iii 缩略词(Abbreviation) v l前言1月U舌．。 ．．1．1 1．1 EttEC 0157：H7和空肠弯曲茵的危害与流行 1 1．1．1 EHEC 0157：H7的危害与流行 ．1 1．1．2空肠弯曲菌的危害与流行 2 1．2检测方法 3 1．2．1分离培养法 3 1．2一免疫学方法 4 ‘1．2．3分子生物学方法 5 1．3 LAMP技术 ．6 1．3．1 LAMP技术的优点 7 1．3．2 LAMP技术的应用 8 1．4 DNA提取方法 ．．8 1．5磁性分离技术 9 1．6研究目的与意义 ．．10 2实验材料 1l 2．1菌株 ．11 2．2培养基 ．．11 2．3主要试剂 ．．1l 2．4主要器材 一12 2．5主要溶液配制 一12 3实验方法 13 3．1细菌基因组提取 一13 3．1．1细菌基因组试剂盒法提取 一13 3．1．2细菌基因组热煮沸法提取 ．．13 3．2 P(：R引物设计与合成 ．13 3．3 HNB．LAMP检测方法的建立及评价 14 3．3．1 L√6山伊靶基因选择 ．．14 3．3．2 LAMP引物设计 一14 3．3．3 LAMP反应体系优化 ．．14 3．3．4 HNB—LAMP检测方法的特异性试验 14 I 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文3．3．5 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文 3．3．5 HNB．LAMP检测方法的灵敏度试验 15 3．3．6 HNB．LAMP方法检测EHEC 0157：H7临床分离株试验 15 3．4氨基磁珠的合成 一1 5 3．4．1裸Fe304磁性纳米粒子的合成 1 5 3．4．2二氧化硅包裹Fe304磁性纳米粒子的合成 16 3．4．3去除未被硅包裹的Fe304磁性纳米粒子 16 3．4．4氨基修饰的硅包Fe304磁性纳米粒子的合成 1 6 3．5氨基磁珠的表征 ．．17 3．5．1傅里叶红外光谱分析 17 3．5．2 X射线衍射分析 ．．17 3．5．3透射电镜分析 ．．17 3．6氨基磁珠吸附DNA条件 17 3．6．1氨基磁珠提取细菌基因组DNA ．17 3．6．2最佳吸附pH 1 7 3．6．3最佳吸附温度 ．．17 3．6．4最佳吸附时间 ．．18 3．6．5最佳氨基磁珠添加量 ．．1 8 3．7人工污染样品检测 ．．1 8 3．7．1氨基磁珠提取人工污染牛奶DNA