免疫荧都光技术.pptVIP

主要内容 8、切片清洗： 为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间 和增多次数）尤为重要，一般在一抗的清洗是5min*3次； 注意（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。 （2）温柔冲洗，防止切片的脱落； （3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。 （4）PBS的PH和离子强度的使用和要求，建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。 （中性及弱硷性条件（PH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解； 低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解） 9、拍照： 封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度； 正确使用荧光显微镜，防止紫外线对眼睛的损害； 检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过2~3h； 荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃，一天中应避免数次点燃光源，关闭汞灯至少在开启15-30分钟后； 时效性：标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发； 使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发