遗传学影 第十四章 基因表达的调控.ppt

第十四章 基因表达的调控 一、原核生物基因表达的调控 （一）大肠杆菌乳糖操纵子的调控机制 1、大肠杆菌对乳糖的利用和酶诱导 诱导作用（induction) 可诱导系统（inducible system) 与乳糖分解利用相关的酶： β-半乳糖苷酶(Z)；半乳糖透性酶(Y)； 硫代半乳糖苷转乙酰基酶(A). （二）大肠杆菌乳糖操纵子的负调控 1961，法国F.Jacob和J.Monod提出 乳糖操纵子学说（operon hypothesis). （三）建立乳糖操纵子模型的相关实验分析 1、相关突变体 （1）结构基因本身改变的突变体 Z+ : 能合成β-半乳糖苷酶 Z- : 不能合成β-半乳糖苷酶 （2）组成型突变体 没有诱导物存在，也能进行酶合成的突变型。 多发生在I基因和O基因上。 lacI-：该组成型突变使阻遏物发生改变，不能连到操纵基因区，结构基因总是处于开放状态。 lacOc：该组成型突变使操纵基因的DNA序列发生改变，不能与正常的阻遏物分子连接，结构基因处于转录状态。 （3）超阻遏物突变体 突变株丧失合成结构基因产物的能力。 lacIs：该突变的效应与lacI-相反，产生的阻遏物分子不能与乳糖相互作用，而是连在操纵基因序列上，使结构基因转录关闭。 2、部分二倍体分析 将带调节基因的Fˊ导入E.coli F- 细胞，构建不同组合的部分二倍体，比较在乳糖存在或没有乳糖时，野生型和突变型基因的活性。  3、调节基因I的功能及其产物分析 （1）调节基因I的功能 P328 表14-1 （2） lac阻遏物的晶体结构分析 ◇阻遏物单体。 ◇阻遏物二聚体，连到两个21bp的操纵基因DNA片段。 阻遏物单体 阻遏物二聚体，连到两个21bp的操纵基因DNA片段 4、操纵基因（O）的确定 操纵基因序列的突变将导致阻遏物不能识别和结合到该部位上。从而造成乳糖利用物质继续合成。 如何识别突变体Oc和I- 。部分二倍体实验。 5、启动子 RNA聚合酶识别和结合部位： -10区： 序列特征 5’-TATGTT-3’ -35区： 序列特征 5’-TTTACA -3’ （四）乳糖操纵子的正调控 大肠杆菌的葡萄糖效应 二、色氨酸操纵子中基因表达时的衰减作用 （一）色氨酸操纵子的结构 编码色氨酸合成相关的五个基因trpE,trpD, TrpC,TrpB,trpA；在这五个结构基因上游有启动 区和操纵基因（trpO）；在第一个结构基因trpE 和trpO之间，有一长达160bp的核苷酸序列，称为 前导序列（L），其中含一段衰减子（A）区段。 二、真核生物基因表达调控 （一）真核生物基因转录水平调节 1、真核基因转录调节中的两种主要成分 （1）顺式调节元件 启动子；近启动子；增强子和沉默子。 （2）转录调节蛋白（反式作用因子） 转录因子；激活因子；铺激活因子；阻遏物。 2、染色质修饰与基因表达 DNA甲基化与基因组印迹。 如小鼠基因组中 IGF-Ⅱ基因。 （二）转录后水平的调控 1、选择性剪接 如 小鼠前速激肽mRNA（preprotachykinin mRNA，PPTmRNA）的不同剪接 PPT基因中的两个外显子P和K，P神经肽主要存在于神经组织中；K神经肽主要发现于肠和甲状腺中。当剪接除去所有内含子和K外显子时，产生α-PPTmRNA，翻译产生P神经肽。当剪接只除去内含子时,产生β-PPTmRNA，翻译产生P和K神经肽。 小鼠前速激肽mRNA（preprotachykinin mRNA，PPTmRNA）的不同剪接 2、反式剪接 3、RNA编辑 （三）翻译水平的调控 卵母细胞中隐蔽mRNA的调控。P366 （四）翻译后调节 蛋白质剪接 （五）基因表达中的RNA调节 RNAi , miRNA * 野生型乳糖操纵子（I+O+Z+Y+A+）的负调控作用 ◆ 细胞中没有乳糖时，阻遏物连到操纵基因上，阻断转录，没有酶产生。 ◆ 细胞中有乳糖时，乳糖与阻遏物连接，诱导转录，产生相应的酶。 *