尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因表达和其和.PDFVIP

第42 卷 第 2 期 水 产 学 报 Vol. 42, No. 2 2018 年 2 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Feb., 2018 文章编号: 1000-0615(2018)02-0291-12 DOI: 10.11964/jfc.20170110680 尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与 荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系 1,2 1 1 1 师红亚 ， 董浚键 ， 张德锋 ， 孙成飞 ， 1,2 1,2 1,2* 田园园 ， 卢迈新 ， 叶 星 (1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所， 农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广东 广州 510380; 2. 上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306) 摘要：为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸 含量、菌株致病性的关系，本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cpsE 、cpsK 和 neuA ，通过qRT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化，同时通 过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化，通过人工感染实验分析了 不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示，cpsE 、cpsK和neuA编码的氨基酸序 列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点，CpsE、NeuA 与已知鱼源GBS (Ia和 Ib 型)和人源GBS (Ia 、Ib和II~IX 型)相应序列的同源性均达到97% 以上，而CpsK 与鱼源、 人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100% 。在不同培养温度下GBS cpsK 和 neuA基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致；在较高温度(28和34 °C)下培养 的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增，而在22 °C 下培养的GBS唾液酸含量最高，攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明，GBS CpsK和NeuA在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用，较低温度下GBS荚膜唾液酸的高 含量有助于其在宿主体内的潜伏，而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾 液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。 关键词: 尼罗罗非鱼；无乳链球菌(GBS) ；温度；荚膜多糖合成基因；荚膜唾液酸；致病力 中图分类号: Q 786 ；S 917.1 文献标志码: A [9] 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)为革兰 鱼生产和出口大国 ，根据农业部渔业渔政管理 氏阳性菌，又被称为B群链球菌(group B Strepto- 局统计数据，2016年我国罗非鱼养殖总产量已达 coccus , GBS) 。它的宿主广泛，包括新生儿， 187万t 。但自2009年起GBS感染给中国养殖罗