医学微到生物第12次实验.pptVIP

白喉杆菌 结核杆菌 芽胞杆菌 实验目的： 通过感性认识，加深对白喉杆菌、结核杆菌、芽胞杆菌生物学性状的印象和记忆。 通过实验掌握两种染色法。 一、白喉杆菌 白喉杆菌（C. diphtheriae）是棒状杆菌属中致病性最强的细菌，是白喉（diphtheria）的病原菌。 白喉杆菌在患者鼻、咽、喉等部位繁殖并产生强烈外毒素，引起感染局部形成假膜和全身中毒症状。 白喉杆菌实验内容： （一） 观察白喉杆菌的形态（阿尔伯染色) （二）观察白喉杆菌在吕氏血清斜面上和亚碲酸钾培养基上的生长情况 （示教） （三）观察白喉杆菌毒力试验（示教） 实验材料： 阿尔伯（Albert）染色 材料： 接种环、酒精灯、生理盐水 玻片 1片/人 白喉杆菌的吕氏血清斜面培养物 1支/2人 阿尔伯染色液 1套/2人 染色缸，染色架，胶瓶 1套/2人 吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸 （一）阿尔伯（Albert）染色实验方法： 步骤 涂片→ 干燥固定→ 阿尔伯“甲液”染7-10分钟后水洗→ 阿尔伯“乙液”染1分钟后水洗 （将观察结果绘图） （二）观察白喉杆菌的生长情况 （示教） （三）观察白喉杆菌毒力试验（示教） 平板毒力试验（Elek平碟法） 白喉外毒素 原理：毒素抗毒素中和(双向琼脂扩散) 白喉杆菌毒力试验（Elek平碟法） 二、结核杆菌 抗酸染色法原理 抗酸性菌体内含脂类物质较多，如结核杆菌（脂质占菌体干重的20～40%，占胞壁干重的60%）体内含有分枝菌酸（脂类），此物质具有抗酸的性质。染色时，它与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用，同时脂类又不易透过细胞膜，不能被脱色，因此抗酸菌能保持复红的颜色。相反，非抗酸性菌体内含脂类少，易被酸性酒精脱色，脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉，最后被复染成蓝色。 （一）抗酸染色法 (复染法) 步骤： 取痰涂片1片→ 固定→ 石炭酸复红染7—10分钟后水洗→ 3%盐酸酒精脱色3—5秒，重复3次，然后水洗→ 碱性美蓝复染2分钟后水洗→ 自干或用吸水纸吸干，然后在油镜下观察结核杆菌的形态、排列及染色性。 （将观察结果绘图） （二）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况（示教）  三、芽胞杆菌 (G+) （一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教） （二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 （示教） （一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教） 形态： 致病菌中最大的细菌 菌体粗大，两端平截或凹陷。 竹节状排列 革兰氏染色阳性 芽胞 荚膜 2.观察炭疽杆菌在血平碟上的生长 专性需氧，灰白色粗糙菌落，边缘呈卷发状，周围无溶血环，（细菌有致病性）。 与枯草杆菌对比（示教）. 对比观察枯草杆菌在血培养基上的生长情况： 专性需氧，菌落周围有溶血环，（细菌无致病能力）。 （二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点 （示教） 1.观察产气荚膜杆菌的形态结构  是G+大杆菌，菌体粗大，两端钝圆,散在排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。位于菌体中央或近极端。菌体周围可形成荚膜。 汹涌发酵现象 在牛乳培养基中分解乳糖，产酸使酪蛋白凝固；产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，甚至冲开管口棉塞，气势汹猛。 1、显微镜（油镜）的使用和保护方法 （1）提供一张细菌玻片标本，要求能正确使用油镜观察到细菌的基本形态； （2）掌握显微镜（油镜）的保护方法 2、血清对倍稀释法 （1）用生理盐水将血清进行对倍稀释，终浓度达到1/2，1/4,1/8三个稀释度； （2）掌握血清对倍稀释的原理和方法，能正确使用刻度吸管。 3、玻片凝集试验 （1）要求用伤寒诊断血清，采用玻片凝集试验的方法检测待检细菌是否为伤寒杆菌； （2）要求操作方法、步骤正确，能准确判断结果； （3）无菌操作正确。 4 、革兰染色法 （1）口试回答细菌涂片的制作方法； （2）将一张已涂好的细菌玻片进行革兰氏染色； （3）要求染色步骤及各项染色时间正确，操作熟练。 5、细菌划线分离培养技术 （1) 将细菌分区划线到普通琼脂平碟上 （2）要求划线分区正确，接种划线手法正确、熟练 （3）无菌操作正确 6、液体培养基的细菌接种方法（无菌操作） （1）将菌种接种到液体培养基内 （2）要求各