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高效液相色谱-测器
结构图 接参比电极 和对电极 接色谱柱 塑料块 工作电极 (Pt, Au, 碳糊) Teflon 1 cm 安培检测器 局限:流动相必须含有电解质,且呈化学隋性。只能检测具有电活性的物质。 极谱检测器 库仑检测器 极谱库、仑检测器结构图 化学发光检测器(Chemiluminescence detector, CD) 该检测器是一种新型检测器。 1、特点:快速、灵敏的新型检测,最小检出量可达10-12g/ml, 设备简单、价廉、线性范围宽等。 2、原理与结构:某些物质在常温下进行化学反应,生成处于激发态势反应中间体或反应产物,当它们从激发态返回基态时,就发射出光子。物质激发态的能量是来自化学反应。当分离组分从色谱柱中洗脱出来后,立即与适当的化学发光试剂混合,引起化学反应发光,通过光电倍增管将光信号变成电信号,进行检测。其光强度与该物质的浓度成正比。 蒸发光散射检测器 (EvaporativeLight-scatteringDetector , ELSD) 通用型检测器。 1、特点:任何挥发性低于流动相的样品均能被检测。敏度高,对温度变化不敏感,基线稳定,适合与梯度洗脱液相色谱联用。能检测不含发色团的化合物,如:碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物(人参皂苷、黄芪甲苷),并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。 检测分为三个步骤: (1)用惰性气体雾化洗脱液 (2)流动相在加热管(漂移管)中蒸发 (3)样品颗粒散射光后得到检测。 2、原理及结构: HPLC柱 喷雾气体 蒸发漂移管 激光光源 样品液滴 光二极管检测器 散射室 结构图 ? 示差折光 紫外 荧光 电导 应用范围 通用 选择性 高选择性 选择性 可否梯度淋洗 不可 可 可 不可 线性范围 104 103 104 最小检测量 10-6g 10-9g 10-12g 10-9g 对温度敏感度 敏感 低 敏感 溶剂使用情况 无限制 受限制 受限制 受限制 几种检测器特性比较 105 低 检测器 应用范围 主要特点 紫外-可见光 有紫外吸收的物质;80%的 有机物都可以检测 池体积可制作得很小;检测后不破坏样品,可用于制备 荧光 自身发荧光的物质或荧光衍 生物 易受背景荧光、pH和溶剂的影响;适用于痕量分析。 化学发光 发光试剂受限制;易受流动相组成和脉动的影响。 电导 含卤、硫、氮化合物具有高 选择和高灵敏度 是离子性物质的通用检测器;不能用于有机溶剂体系。 电化学 具有氧化还原活性的或某些 没有氧化还原活性的物质经 过衍生化后也能进行检测 易受流动相pH值和杂质的影响;稳定性较差。 蒸发光散射 任何挥发性低于流动相的样 品均能被检测 可检测所有物质。 示差折光 对所有溶质都有响应 可检测所有物质;不适合微量分析 其它检测器 质谱检测器 激光检测器 红外检测器 柱后反应检测器 介电常数检测器 放射性同位素检测器 离子选择电极检测器 旋光检测器 圆二色谱检测器 等等 高效液相色谱 检 测 器 侯建军 检测器 是高效液相色谱仪的核心部件,他负责把从色谱柱分离出来的各组分快速、准确的检测出来,实现定性、定量分析。 检测器的分类 1、 紫外可见吸收检测器(UV) 2 、光电二极管阵列检测器 ( PDA) 3 、荧光检测器( FD) 4 、示差折光检测器( RID) 5 、电化学检测器( ED) 6 、化学发光检测器( CD) 7 、蒸发光散射检测器(ELSD) 紫外可见吸收检测器 (ultraviolet-visible detector,UV) 紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的 检测器,几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。 属于选择性检测器。 1 、特点:灵敏度较高,线性范围宽,噪声低,波长可选,对流动相的流速和温度变化不敏感,适用于梯度洗脱,对强吸收物质检测限可达10-9g/ml以下,检测后不破坏样品,可用于制备,并能与多种检测器串联使用。工作原理与结构同一般分光光度计相似,也就是装有流通池的紫外可见分光光度计。 2、结构与原理:紫外吸收检测器常用氘灯作光源,氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长,并安装一个光栅型单色器,其波长选择范围宽(190nm~800nm)。 它有两个流通池,一个参比池,一个测量池。光源发出的紫外光照射到流通池上,若两流通池都通过纯的均匀溶剂,则它们在紫外波长下几乎无吸收,光电管上接受到的辐射强度相等,即无信号输出。当组分进入测量池时,吸收一定的紫外光,使两光电管接受到的辐射强度不等,即有信号输出,输出信号大小与组分浓度有关。 可变波长紫外检测器 固定波长紫外检测
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