原核生物目基因表达调控.ppt

原核生物基因表达调控 How many genes are expressed? 第一节 乳糖操纵子 乳糖操纵子的发现: 大肠肝菌能够利用乳糖： 环境中乳糖作为唯一碳源→ 表达并合成一系列与乳糖代谢相关的酶类 环境中没有乳糖 → 编码上述乳糖代谢酶的基因则被关闭 当诱导物不存在时，操纵子以极低的基础水平转录 诱导物的加入激活转录，使lac mRNA水平迅速上升 诱导物一旦除去，转录立刻停止，lac mRNA极不稳定很快降解，细胞内lac mRNA含量恢复到诱导前的基础水平 诱导后蛋白质含量的上升相对于mRNA水平的变化存在一个滞后期 诱导物除去后，酶的合成立即停止，但由于蛋白质较稳定，酶活性可长时间保持在诱导水平 操纵子 反式作用突变鉴定调节基因： lac I– ：阻遏蛋白不能识别操纵基因 为隐性遗传，只要引入正常的lac I＋基因，并进行诱导，即可恢复正常的调控 lacIs ：调节蛋白不能和诱导物结合 为显性遗传，突变的阻遏蛋白和细胞内所有的乳糖操纵子结合并阻遏转录，即使有野生型阻遏蛋白存在也不会脱离 顺式作用突变来鉴定操纵基因： Oc 突变：操纵基因发生突变，不能和阻遏蛋白结合 导致RNA聚合酶可以不受限制地从启动子开始转录，结构基因组成型表达 乳糖操纵子模型： Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码。 该mRNA分子的启动子（P）位于调节基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透性酶基因的高效表达。操纵区是阻遏蛋白的结合位点。 当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。 活性阻遏蛋白是由4个相同亚基组成的同源四聚体 阻遏蛋白具有两个结合位点：操纵基因结合位点和诱导物结合位点 阻遏蛋白和DNA的结合能增强RNA聚合酶结合DNA的能力，只是结合的RNA聚合酶不能起始转录 阻遏蛋白单体的结构： 由N端DNA结合域、铰链区和核心区三部分组成 DNA结合域包含两个α螺旋，由一个转角分开 铰链区连接DNA结合域和核心区 核心区 由核心结构域1和核心结构域2组成； 诱导物结合在两个结构域之间的裂隙中； C端负责亚基间的寡聚化 诱导物通过与阻遏物结合，改变它的构象，使之不能与操纵区相结合，从而激活lac mRNA的转录。 诱导物和结合于操纵基因上的阻遏物结合，使其从操纵基因上释放。而不是和游离阻遏物结合，影响阻遏物和DNA结合的平衡 阻遏蛋白结合诱导物后构型的变化： 阻遏物由两个二聚体组成四聚体； 二聚体的两个DNA结合域可以同时插入DNA大沟的两个相邻连续转角； 诱导物结合，改变了DNA结合域和核心区之间的角度方向，使二聚体两个头部不能同时和DNA结合，从而降低和操纵基因的亲和力 阻遏物同时结合两个操纵基因 乳糖操纵子的操纵基因两侧，还存在两个较弱的额外操纵基因（pseudo-operator） 完全阻遏转录，阻遏蛋白四聚体除了和操纵基因结合外，还需要和其中一个额外操纵基因结合 同时和四聚体结合的两个操纵基因之间的DNA，弯曲形成环状结构 诱导物改变阻遏蛋白在DNA上的分布，而不是产生游离阻遏蛋白： 随机DNA序列和阻遏蛋白也具有亲和力，但比操纵基因和阻遏蛋白的亲和力低107倍 诱导物和阻遏蛋白结合时，阻遏蛋白和操纵基因的亲和力下降，所有阻遏蛋白结合在DNA的随机序列上 除去诱导物后，阻遏蛋白恢复活性，从随机位点直接转移到操纵基因上 乳糖操纵子 操纵子模型 正调控和负调控： 根据操纵子在没有调节蛋白时的反应来定义： 负调控基因除非被阻遏蛋白关闭，否则一直表达 正调控基因只有在活性调节蛋白存在时，才会被表达 诱导和阻遏： 根据操纵子对调节其表达的小分子所产生的不同应答反应来定义 诱导物：An inducer is a small molecule that triggers gene transcription by binding to a regulator protein. 辅阻遏物：A corepressor is a small molecule that triggers repression of transcription by binding to a regulator protein. 第二节操纵子的其他调控形式 大肠杆菌色氨酸操纵子的负调控： 色氨酸操纵子控制5种酶的合成，由trp E, D, C, B, A编码 当色氨酸缺乏时，调节基因（trpR）编码无活性的aporepressor阻遏蛋白 当细胞中色氨酸浓度较高时，色氨酸和aporepressor结合，形成有活性的色氨酸操纵子阻遏蛋白 二、大肠杆菌色氨酸操纵子的衰减作用： Trp mRNA的5’端有139个核苷酸组成的前导序列，前导序列有4个区域彼此