FKNC3CR1在高级灵长类物种中的协同进化及其功能研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 论文独创性声明本论文是我个人在导师指导 论文独创性声明 本论文是我个人在导师指导F进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除 了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的 研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明 并表示了谢意。 作者签名 日肌扩矾、孓。。 论文使用授权声明 本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学样可以公布论文的全部或部分内 容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此 规定。 作者躲幽1师签名 日期：。∥乇、}～了b Fl(N／ Fl(N／cx3cRl在高级灵长类物种中的协同进化及其功能研究 英文缩写 英文缩写 缩写 英文名称 中文名称 FKN Fractall【ine 分形素 CX3CRl Cx3C ch锄幽ne Receptorl CX3C趋化因子受体1 HUM Hum锄 智人 C肿 ChimpaIlzce 黑猩猩 GOR Gorilla 大猩猩 ORA omngut觚 红毛猩猩 GIB Gibbon 长臂猿 OWL Old Wbdd Monkey 旧大陆猴 SOE_PCR gene splicing by overlapping extcnsion PcR 基因重叠延伸拼接PCR oRF opell Reading Fmgmem 开放读码框 DC Denddtic cell 树突状细胞 CHO Chinese hamster ovary cell 中国仓鼠卵巢细胞 4 FKN， FKN，cx3cRl在高级灵长类物种中的协同进化及其功能研究 中文摘要 n刚7C】ba阻在高级灵长类物种中的协同进化及其功能研究 中文摘要 关键词：FKN，cx3cRl，人猿超科，旧大陆猴，基因协同进化，负选择位点， 达尔文正选择位点，缺失突变，结构与功能 FlN／Cx3cRl在白细胞迁移、炎症反应、免疫细胞分化、移植排斥反应等过 程中发挥极其重要的作用。近十年来，通过生物化学的方法对FKN／CX3CRl的结 构和功能的研究取得一些进展，然而决定FKN／cx3cRl功能的结构基础迄今没有 系统的研究，本研究通过比较基因组学的方法，系统分析了FKN／cx3cRl可能存 在的负选择位点、达尔文正选择位点和缺失／插入位点对FKN／Cx3CRl介导的免 疫学功能的影响，首次比较全面的阐述FKN／CX3CRl结构与功能的关系，为研究 趋化因子及其受体结构与功能的关系提供了新的策略。 1．n矾慨3cRl在高级灵长类物种中的比较基因组学研究 观察旧大陆猴(Old wDrld Monkey)包括猕猴(Macaque)和叶猴(Leaf Monl(ey)；人猿超科(Homonid)包括智人(Humall)、黑猩猩(ChimpaIlzee)、 大猩猩(Gorilla)、红毛猩猩(O删19utall)和长臂猿(Gibbon)7个高级灵长类 物种的FKN／CX3CRl的基因进化规律，用简并引物PCR法分别扩增FKN的3 个外显子和CX3CRl后测序并拼接序列，应用MegAli驴分析FKN／Cx3CRl基 因可能存在的缺失／插入位点；应用D眦吼oIllcey软件分析FKN，Cx3CRl的负选 择位点；用Mega中的ME法重构FKN／Cx3CRl基因进化树，用PAML中的 codeml程序估算每一枝上氨基酸的P距离并对其替换速率和选择压力变化做最 大似然法分析，用sPss进行Pearson相关系数检验。MegAli驴分析显示人猿 超科较旧大陆猴FKN基因有一明显的10个氨基酸大片段缺失突变。Datalnolll【ey 分析结果显示FKN存在负选择位点30Q、61D、216N，Cx3cRl存在负选择位 点4F、259Y；ME法构建的FKN，CX3CRl基因进化树显示其和物种树均保持 一致，Pears伽相关系数检验显示FKN／Cx3cRlr值为O．64，而对照组r值为0．07， (p0．001)；PAML替换速率分析表明在人和黑猩猩上FKN存在达尔文正选择 位点A33、141、D53、K55、K60、R68和E86，CX3CRl存在达尔文正选择位 点K95、D270。结果提示从旧大陆猴向人猿超科进化过程中，FKN／Cx3cRl可 能由于负选择位点、达尔文正选择压力以及基因的缺失突变而保持协同进化。 2．nd脓3CRl分子及突变子的基因克隆和表达 FKN， FKN，cx3cRl在高级灵长类物种中的协同进化及其功能研究 中文摘要 克隆旧大陆猴和人猿超科7个物种FKN、CX3CRl全基因及其突变体并进行 体外表达，为后续观察FKN／Cx3CRl在高级灵长类物种进化过程中免