《柠檬酸液态发酵及提取工艺》-课件设计（公开).pptVIP

种子制备方法二 接种：用无菌水将麸曲孢子制成孢子悬液，按1‰接种于摇瓶中； 接种量：一支斜面接4～5瓶， 摇瓶培养：八层纱布盖口，回旋式摇床，38℃，100转/min培养20 h；或35℃下、转速200r/min(24h前l00，24 h后200r/min)、300r/min(24h前l00，24h后300r/min) ，培养3～4 d。 镜检：显微镜观察，处于快速生长期，可用于接种。 1.4.2 发酵液预处理 取细度为60目以上的玉米粉300g装入2000ml烧杯中，加入1000mL水和7～8个单位α-淀粉酶(高温)/g玉米粉； 于80℃液化l0min后，继续加热至90℃保温30min，碘检不变色后，再加热到100℃煮沸(5～l0min)，趁热经过二层纱布过滤; 滤液加水冷却并调整糖度至15％～20％和蛋白质含量不超过4g/L，pH6.0。 取过滤清液50 mL分别装入500mL三角瓶中，瓶口塞入8层纱布包扎好，于121℃灭菌15～20min，冷却备用。 1.4.3 发 酵 为两个阶段： 第一阶段为前24 h，温度32～35℃，转速100 r/min ； 第二阶段为24 后 ，温度35℃，转速200 r/min； 发酵0、24、48、72、96h取样，0 h样品直接取1瓶作对照，并从中取10 ml冷冻保存。其它时间取样时，每个样品仅取1 ml冷冻保存，取样时用试纸现场检测pH值。 1.4.4 发酵过程及分析 样品80℃水浴30 min，3000 r/min，10 min离心去掉菌体等杂质，收集上清，作检测，如果检测样品量不够，可对上清进行适当倍数稀释； 柠檬酸含量检测：一般检测发酵过程中的总酸，采用0.1429mol／L NaOH溶液滴定上清液； 总糖及残糖(还原糖) 采用测定：试剂或DNS法，测上清的总糖。 1.4.5 柠檬酸提取 过滤： 加热至65±2℃，3 层纱布过滤，可用少量75±2℃水洗； 离心：3000 r/min，10 min离心去掉菌体等杂质； 水洗：75±2℃水洗至柠檬酸＜1％； ④ 中和 滤液中除含柠檬酸外，还含可溶性的残糖以及蛋白质、金属离子等杂质。利用柠檬酸钙难溶于水的特点，与杂质分离； 将经过沉淀的清液移入烧杯，加热至70～75℃ ，加入碳酸钙中和，边加边搅拌，至pH6.1（每100 g柠檬酸需加入71.4 g碳酸钙，一定要控制好终点），终点可用NaOH滴定，或直接测定 pH值，此时柠檬酸呈钙盐析出； 加完碳酸钙后，升温到90℃，保持0.5 h侍碳酸钙反应完成后，沉淀 10 min，吸去残酸，脱水，用95℃以上的热水洗涤钙盐，以除去表面附着的杂质和糖分。在这里要重点检查糖分是否洗净，方法是将1～2%的高锰酸钾溶液滴一滴到20毫升洗水中，3 min不变色即说明糖分已基本洗净； 脱水，收集柠檬酸钙。 ⑤ 酸解 酸解是将已洗净的难溶性的柠檬酸钙与硫酸作用，生成柠檬酸与硫酸钙。反应式如下：Ca(C6H5O7)2+3H2SO4=2C6H8O7+3CaSO4 柠檬酸钙用水稀释成糊状，慢慢加入硫酸（用量为碳酸钙的85～95%为宜），加热至90℃反应30分钟，至pH1.5～1.8，生成柠檬酸和硫酸钙沉淀； 在加入计算量的80%以后，即要开始测定终点。方法如下：取甲乙两支试管，甲管吸取20% H2SO4 1 ml ，乙管吸取20% CaCl2 1 ml，分别加入1毫升过滤后的酸解液，水浴加热至沸，冷却后观察两管溶液，如果不产生混浊，再分别加入1 ml 95%酒精，如甲乙两管仍不呈混浊，即认为达到终点。 过滤、洗酸：滤液含较纯的柠檬酸，真空抽滤，90℃热水洗沉淀至无酸； ⑥ 脱色 在所得清液中，加入活性炭（一般用量为柠檬酸量1～3%，视酸解液的颜色而定）脱色，在85℃左右保温30 min，即可过滤。 滤瓶用85℃以上热水洗涤，洗至残酸低于0.3～0.5％即可结束，洗水单独贮放，作为下次酸解时的底水使用。 1.4.6 柠檬酸精制 离子交换：阳离子交换：主要除钙离子、铁离子；终点控制，黄血盐检验铁；阴离子交换：主要除硫酸根、氯离子；终点控制，AgNO3 检验 Cl-，BaCl2 检验 SO42-。 蒸发浓缩：旋转蒸发器，50～60℃；终点控制，比重：1.345～1.36或达36.7～37波美度时即可。 结晶分离：分批冷却结晶；36.5℃，12 h，过滤、分离。 干燥包装：真空干燥器35℃以下干燥，质检、装袋、封口。 2 结果 2.1 种子的制备 记录黑曲霉在斜面，麸皮培养基，摇瓶培养基中的形态特征。 摇瓶取样检测黑曲霉形态； 2.2 发酵液预处理 发酵液糖含量； 发酵液总量； 2.3 发酵过程控制 温度控制数据； 2.4 取样及分析 时间 残糖含量 柠檬酸含量 pH值 其它 记录各项测定指标及数据 平均耗糖速率(