致病菌对检验方法((cly).ppt

致病菌检测方法 福建省疾病预防控制中心 陈路瑶 需要检测的致病菌 乙型溶血链球菌 大肠杆菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌 沙门氏菌 溶血性链球菌 检测依据：GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 检验程序 1、菌落特征： 溶血性链球菌菌落 特征：灰白色细小 针尖样。菌落周围 形成一个2-4mm宽、 界限分明、完全透 明的无色溶血环。 2、革兰氏染色： 乙型溶血性链球菌 为革兰氏阳性球菌， 在镜下呈现为蓝紫 色，圆形，链状排 列。 3、杆菌肽敏感试验 乙型溶血性链球菌 对杆菌肽敏感，在 涂布了该菌菌液的 血平板上贴上杆菌 肽，36℃培养18~ 24h，如果有大于 10mm的抑菌带出 现即为阳性。 4、链激酶试验 乙型溶血性链球菌能产生 链激酶，能激活正常人体 血液中的血浆蛋白酶原， 凝固 形成血浆蛋白酶，而后溶 解纤维蛋白。试验中，能 使凝固的血浆完全溶解为 溶解 链激酶试验阳性。 大肠杆菌 依据：GB15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 附录B3 大肠菌群检测方法 1、发酵试验 取样液5ml接种50ml乳糖 胆盐发酵管，置37℃培养 24h，如不产酸不产气， 则报告为阴性，如产酸产 气，则进行下一步试验。 2、接种平板 乳糖胆盐发酵试验阳性的管， 划线接种伊红美蓝平板。典 型的大肠杆菌菌落为黑紫色 或红紫色，圆形，边缘整齐， 表面光滑湿润，有金属光泽， 也有的呈紫黑色，不带或略 带金属光泽，或粉红色，中 心较深的菌落。 3、革兰氏染色 取疑似菌落作革兰氏 染色镜检，大肠杆菌 为革兰氏阴性杆菌， 镜下呈红色杆状。 5、复发酵 伊红美蓝平板上的 疑似菌落在染色镜 检的同时接种乳糖 发酵管，如有产酸 产气，则可报告检 出大肠杆菌。 绿脓杆菌 依据：GB7918.4-87 化妆品微生物标准检验方法 绿 脓 杆 菌 检验程序： 1、增菌培养 如有绿脓杆菌生长， 培养表面多有一层 薄菌膜，培养液常 呈黄绿色或蓝绿色 2、分离培养 绿脓杆菌菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿 润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。 3、染色镜检 取疑似菌落作革兰氏 染色镜检，绿脓杆菌 为革兰氏阴性杆菌， 镜下呈红色短杆状。 4、氧化酶试验 挑取绿脓杆菌可疑菌落 涂在白色滤纸上，加一 滴新配制的1%二甲基对 苯二胺试液，在15~30s 内，出现粉红色或紫红 色，为阳性，无色或淡 黄色为阴性。 5、绿脓菌素试验 取可疑菌落接种绿脓菌素鉴 定用培养基，37℃培养24h, 加入氯仿3~5 mL，充分振荡 使培养物中的绿脓菌素溶解 于氯仿液中，等氯仿提取液 呈蓝色时，用吸管将氯仿移 到另一试管内并加入1mol/L 的盐酸1 mL，振荡，静置片 刻，如上层盐酸内出现粉红 到紫红色时，为阳性，表示 有绿脓菌素存在。 6、硝酸盐还原产气试验 接种被检纯培养物于 硝酸盐胨水培养基中， 37℃培养 24h。小倒 管中有气体者，为阳 性，表明该菌能还原 硝酸盐，产生氮气。 7、明胶液化试验 将可疑菌落穿刺接种在明胶 培养基内，37℃培养24h,取 出放冰箱10~30min，如何呈 溶解状态，即为明胶液化试 验阳性，如凝固不溶者为阴 性。 8、42℃生长试验 挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基 上，放在41℃~42℃培养箱中24h~48h，绿脓 菌能生长，为阳性。不能生长为阴性。 金黄色葡萄球菌 依据：GB7918.5-87 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌 检验程序 1、增菌： 取样液按1：10比例接 种到SCDLP液体培养基 中，或者可用7.5 %氯 化钠肉汤，置 37℃培 养箱，培养24h。 2、分离 将增菌培养液划线接种 于血琼脂平板置37℃培 养24~48h，菌落呈金黄 色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，周 围有溶血圈。 3、染色镜检 挑取可疑菌落涂片 染色镜检，该菌为 革兰氏阳性球菌， 排列成葡萄状，蓝 紫色。 4、甘露醇发酵试验 取上述分纯菌落接种 到甘露醇发酵培养基 中，置 37℃培养箱， 培养24h。金黄色葡 萄球菌应能发酵甘露 醇产酸。 5、血浆凝固酶试验 玻片法：取清洁干燥载玻片上，一端加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取菌落，分别在生盐及血浆中充分研磨混合。血浆与菌在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象都为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验阴性或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。 5、血浆凝