植物细胞培个养11.ppt

;2.1 植物组织与细胞培养区别 组织培养概念：指从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存或生长成组织。 细胞培养概念：植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 ;2.2 植物组织的发展简史;;2.3 植物组织培养重要概念和理论基础;;;;;;;;;;;;;1、器官发生途径;;;;;;2、体细胞胚胎发生途径;;2.4 植物组培的实验条件;培养室： 对接种到培养瓶等器皿中的植物离体材料进行控制条件下的培养 要求：约需10-20平方米左右。基本要求是能够控制光照和温度，并保持相对的无菌环境， 设备：培养架、光照培养箱或人工气候箱、温湿度计、空调等。 缓冲间：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作人员在此换上工作服、拖鞋，戴上口罩，才能进入无菌室和培养室。 要求：缓冲间需3-5平方米，可建在准备室外或无???操作室外，应保持清洁无菌；备有鞋架和衣帽挂钩，并有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服；墙顶用1-2盏紫外灯定时照射，对衣物进行灭菌。 设备：1-2盏紫外灯、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩。 ;;;;;;;;培养室;;;2.5 植物组织培养步骤;;;;;3、制备外植体： 用消毒过的器械无菌操作将外植体置于培养皿上。 切取外植体为适当大小，一般0.2-0.5cm。 4、接种和培养 诱导培养基成分一般为基本培养基+细胞分裂素+生长素+附加成分, 基本培养基一般选择MS配方 （1）接种：每瓶约4～10个 （2）封口 （3）培养条件：温度为25+2℃ 光照为1000～4000lx pH值常为5.6～6.0 培养室的相对湿度要常保持在70～80%。;;;;;;;2.6 愈伤组织形成的过程 ;1、诱导期：细胞分裂的准备期 诱导期是细胞准备进行分裂，需加入诱导剂或细胞分裂素。 2、分裂期：细胞从开始分裂到持续分裂的时期 。 分裂期的愈伤组织的共同特征是：细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态。 ;;;;;复 习;;;;植物组织培养举例;二、繁殖方法 (一)愈伤组织培养 将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。在超净台上，先用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。大约15-25d后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。愈伤组织形成1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。 (二)继代培养 将愈伤组织在无菌条件下，用解剖刀将愈伤块切成数个小块，再接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。几天后，小愈伤块即可逐渐长大，这一过程称作继代培养。通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个芦荟茎尖组织可繁殖出大量的新接种材料来，用于分化培养。;(三)分化培养 将愈伤组织在无菌条件下，从试管或三角瓶中取出，用无菌水洗净，切成小接种块，接种到装有分化培养基的三角瓶中，分化培养的条件同愈伤组织培养。大约30-50d后，愈伤组织就可分化出芽，并继续长出小叶片。当分化出的幼苗长到一定高度或分化出一定数量后，将这些小幼苗在无菌条件下取出，进行生根培养或重新诱导分化。 (四)生根培养 当三角瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的三角瓶中培养，培养条件同分化培养。大约半个月后，幼苗即可生根。 (五)炼苗 当幼苗的根长到一 定长度，幼苗形体已显健壮时。将幼苗取出，在清水中洗除附着在根上的培养基(注意:一定要严格洗净，否则会烂根)。 (六)移栽 炼苗后，将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化，每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水，大约15-20d后，视幼苗长势，即可移栽到苗圃中。 ;;1、在植物育种上的应用 突变育种：无论是愈伤组织培养还是细胞培养，培养细胞均处在不断分生状态，容易受培养条件和外界压力的影响而产生诱变，从中可以筛选出对人们有用的突变体，从而育成新品种。 原生质体融合和细胞杂交：可部分克服有性杂交不亲和性，而获得体细胞杂种，从而创造新种或育成优良品种。 单倍体育种：利用花药培养诱导花粉形成单倍体，在试管培养中通过秋水仙素处理，使染色体加倍，而成为纯合二倍体植物，从而缩短新品种育种的时间，还有利于突变中隐性突变的分离。 ;;2、在植物脱毒和快速繁殖上的应用 　植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个方面。很多农用物都带有病毒，特别是无性繁殖植物