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Gufalin通过ERKRSK2通路对ECA109胞和裸鼠移植瘤作用的研究
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺
河北医科大学
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研究生签名:理鹊导师签章:却闱[筝二级学廊蔷尊甍亨毫.一j
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本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。
研究生签名:理鹄 翩擗彳呼
年 月√日
万方数据
目
目 录
中文摘要 1
英文摘要 5
英文缩写 11
研究论文 Bufalin 过ERK/RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作 用的研究
前言再U舌 .12·lz
材料与方法 .13
结果 28
附图 32
附表 47
讨论 55
结论 57
参考文献 58
综述RSK2与肿瘤的研究进展 62
致谢 70
个人简历 71
万方数据
中文摘要Bufalin通过ERK/RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作用
中文摘要
Bufalin通过ERK/RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作用
的研究
摘 要
食管癌是人类常见的消化道肿瘤,其发病率居世界恶性肿瘤的第8 位,死亡率居第6位。我国位于食管癌高发地区,男性发病率高于女性, 平均死亡年龄63岁。随着分子生物学研究的不断深入,发现食管癌的发 生、发展是一个多基因、多因素、多阶段的进行性过程。近年来信号转导 通路及抗肿瘤药物的作用机制成为研究重点,为临床治疗食管癌提供了方 向。
P90核糖体S6激酶2(Ribosomal S6 kinase 2,RSK2)是p90RSK蛋 白家族的成员,同时也是细胞外调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated protein kinases 1 and 2,ERKl/2)下游重要的一级效应分 子。活化的RSK2通过调节与增殖相关的糖原合成激酶3(Glycogen synthase kinase 3B,GSK31])、促凋亡蛋白BAD、与细胞迁移和侵袭相关 的肌动蛋白Fascin.1等下游靶分子影响细胞的增殖、凋亡、侵袭与迁移。 Bufalin(蟾蜍灵)是我国传统中药蟾酥中的主要成分,属强心甙类物 质,其分子式为C2。H3404,相对分子量为386.5。我们前期研究结果表明 bufalin可以在体外抑制ERK的磷酸化,为进一步探讨其在体内的作用及 对下游通路的影响,本实验以食管癌ECAl09细胞为研究对象,并通过将 ECAl09细胞接种于裸鼠,建立食管鳞状细胞癌移植瘤,探讨bufalin通过
ERK/RSK2通路对食管癌细胞及裸鼠移植瘤的影响。
目的:探讨Bufalin通过ERK/I{SK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤
作用的研究。
方法:
1使用CCK.8检测bufalin作用ECAl09细胞不同浓度及时间的增殖 抑制率。
2使用TUNEL标记法检测不同浓度的bufalin干预ECAl09细胞各 组的凋亡指数。
3使用划痕实验研究不同浓度bufalin对食管癌细胞迁移的影响;在
万方数据
中文摘要此基础之上,利用Transwell小室实验检测bufalin对食管癌细胞侵袭与
中文摘要
此基础之上,利用Transwell小室实验检测bufalin对食管癌细胞侵袭与 迁移的影响。
4建立裸鼠食管癌细胞移植瘤模型,观察模型组、bufalin低剂量组 (BL,0.5mg/kg)、bufalin中剂量组(BM,1.0mg/kg)、bufalin高剂量 组(BH,1.5mg/kg)、PD98059组(3.0mg/kg)、联合组(BP’bufalin+PD98059)
裸鼠的体重来评价bufalin对裸鼠食管癌移植瘤的影响,并通过测量原位
瘤的体积来检测bufalin的抑瘤作用。 5显微镜下观察各组的移植瘤组织学表现,TUNEL标记法检测裸鼠
移植瘤的凋亡指数。 6实时定量PCR法检测裸鼠移植瘤中ERK及RSK2的mRNA的表
达。
7 Westem blot方法及免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤中ERKl/2、 RSK2、通路下游靶分子GsI(3 13、BAD蛋白表达及其磷酸化和Fascin.1 的蛋白表达。
结果:
l CCK.8结果显示以不同浓度bufalin(20、40、60、80、100 nmol/L) 干
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