聚乳酸软骨组织工程支架制备 改性及其细英胞相容性分析.docx

浙江大学罅士学位论文(2003) 摘要 摘要 研究了聚一L．乳酸(PLLA)软骨组织工程支架的制备、改性及细胞相容性。首 先以PLLA平面膜为研究模型，研究了亲水性单体在PLLA表面的接枝聚合、生物 大分子在PLLA平面膜表面的化学接枝和涂层、生长因子在PLLA平面膜表面的引 入。以致孔剂法和热致相分离法制备了PLLA多孔支架。最后将PLLA平面膜的表 面改性技术应用于PLLA多孔支架的改性，制备了具有良好细胞相容性的软骨组 织工程用可降解多孔支架。 采用过氧化氢溶液中紫外光氧化的方法在PLLA膜表面引入了大分子过氧化 氢基团。采用碘量法测定了PLLA膜表面大分子过氧化氢基团的浓度，并考察了 氧化时间和氧化温度的影响。随氧化时间延长，大分子过氧化氢基团的浓度先升 后降。氧化温度升高能够加快氧化过程的进行。 利用光氧化后PLLA膜表面的大分子过氧化氢基团作为自由基接枝聚合的引 发剂，采用紫外光引发或Fe”辅助引发的方式，引发了亲水性单体甲基丙烯酸羟 乙酯(HEMA)、丙烯酰胺(AAm)或甲基丙烯酸(MAA)在PLLA膜表面的接枝聚 合，从而将羟基、酰氨基或羧基引入材料表面。ATR-IR和XPS测试结果证明了接 枝聚合的发生。接触角测试结果表明改性后PLLA膜表面的亲水性明显提高。采 用ATR．IR、XPS和比色法表征了PLLA膜表面亲水性聚合物的接枝量，结果表明 接枝量随单体浓度的提高和接枝时间的延长而增大。采用SEM和SFM考察了改性 前后材料表面形貌的变化，结果表明接枝改性使得材料表面的粗糙度增大。与紫 外光引发接枝聚合所得到的PLLA改性膜相比，phFe2+辅助引发接枝聚合所得到 的PLLA改性膜表面的亲水性聚合物的分布更为均匀，表面粗糙度较低。 采用软骨细胞培养考察了接枝改性对材料细胞相容性的影响。材料表面亲水 性官能团的引入没有明显提高细胞的粘附率和增殖率，但却对细胞的铺展性能有 重要影响。通过改变单体浓度和接枝时间，制各了一系列不同接枝量的 PLLA-g—PAAm和PLLA．g—PMAA平面膜，并考察了材料表面不同的官能团以及材 料表面的亲水性对细胞铺展性能的影响。结果表明细胞只有在适度亲水性的表面 才有良好的铺展性能，呈多角状；而在较高疏水性或较高亲水性的表面细胞主要 呈球形并团聚成细胞团。官能团的种类以及表面电荷对细胞的铺展性也有重要影 响。 为了将生物大分子化学接枝于PLLA膜表面，首先在PLLA膜表面接枝 PMAA，将羧基引入PLLA表面，利用水溶性碳化二亚胺EDAC作为缩合剂，与 含有氨基的生物大分子反应，可将生物大分子如明胶、胶原和壳聚糖化学接枝在 PLLA膜表面。ATR．IR、XPS和茚三酮测试结果均证明了接枝的发生，但也表明  濒江大学礴士学位论文(2003) 摘要 生物大分子的接枝量较小(1099／cm2)。为了提高材料表面生物大分子的含量， 在化学接枝生物大分子后的PLLA表面进一步涂层生物大分子溶液。采用PBS中 浸洗的方法研究了生物大分子涂层的稳定性，结果表明胶原涂层和壳聚糖涂层具 有良好的稳定性。软骨细胞培养结果表明明胶涂层或胶原涂层可明显提高细胞在 PLLA膜表面的粘附率、增殖率、细胞活性和铺展性能。进一步利用“接枝．涂层” 技术，将含有生长因子BMP或bFGF的胶原溶液涂层在PLLA膜表面，制备了含有 生长因子的活性PLLA材料。软骨细胞培养结果表明BMP可明显提高单个细胞的 MTT活性。bFGF虽然能够大大提高单个细胞的MTT活性，但不利于细胞的增殖。 分别利用腊球滤出法和热致相分离法制备了具有良好孔连通性的PLLA多孔 支架材料。对于腊球滤出法，研究了腊球直径、腊球用量和PLLA溶液浓度对多 孔支架结构的影响。对于热致相分离法，研究了PLLA溶液浓度、溶剂组成、粗 化时间、粗化温度对多孔支架结构的影响。通过控制适当的制备条件，可得到符 合组织工程所要求的孔径在150-3509m，孔隙率大于90％的多孔支架。 利用抽真空然后恢复常压的办法将液体导入多孔支架内部，利用离心的办法 将液体从支架内部去除，上述简单技术解决了对多孔支架改性时的物质扩散难的 问题，使得将PLLA平面膜的改性技术应用于PLLA多孔支架的改性成为可能。研 究了采用Fe2+辅助引发的方式在PLLA多孔支架内部表面接枝PAAm和PMAA，与 空I刍PLLA多孔支架相比，细胞在改性后的支架内部铺展良好、分布均匀。研究 了明胶和胶原在多孔支架内部的接枝和涂层，利用茚三酮法考察了多孔支架中的 胶原或