APP分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定-中国药理学通报.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１２Ｍａｒ；２８（３）：３３７～４２ ·３３７· 网络出版时间：２０１２－３－２１６：０３　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１６０３．２０１２０３．３３７＿０１０．ｈｔｍｌ ＡＰＰ 分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定 β 黄　巍，周丽荣，周　婷，孙红霞，黄晓刚，刘　桥 （武汉市医学科学研究所基础医学研究室，湖北 武汉　４３００１４） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１２．０３．０１０ γ分泌酶再水解剩下的ＡＰＰ片段产生各自代谢产 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１２）０３－０３３７－０６ ［１］ 物。Ａ 由 和 分泌酶依次水解ＡＰＰ产生 ，具 β β γ 中国图书分类号：Ｒ３４１；Ｒ３９２．１１；Ｒ７４５．７；Ｒ９７７．３ 有毒性；和 分泌酶依次水解ＡＰＰ，产生的可溶性 α γ 摘要：目的　制备针对人淀粉样蛋白前体（ＡＰＰ） 分泌酶切 β ｓＡＰＰ 肽和 Ｐ３肽段则具有神经营养等作用。若 α 割位点的特异性单链抗体（ＳｃＦｖ），并进行鉴定。方法　设计 ＡＰＰ的 和 代谢失去平衡，产生过多的Ａ ，就容 α β β 扩增单克隆抗体细胞株重链和轻链可变区基因片段 Ｖ 和 Ｈ Ｖ 的引物，利用ＲＴＰＣＲ技术，从本室制备的抗人 ＡＰＰ 分 易诱发ＡＤ。 Ｌ β 　　ＡＰＰ 分泌酶切割位点是Ａ 产生的关键位点， 泌酶切割位点单克隆抗体细胞株中扩增出Ｖ 和Ｖ 基因片 β β Ｈ Ｌ 容易受到周围空间环境影响，如将 Ａ 抗体与ＡＰＰ 段，然后通过重叠引物延伸法（ＳＯＥ）将 Ｖ 和Ｖ 基因拼接 β Ｈ Ｌ 成ＳｃＦｖ基因片段，再将其亚克隆入原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ 结合，当抗体识别位点靠近Ａ 的Ｎ端，即靠近ＡＰＰ β 中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）诱导表达，目的蛋白经镍柱纯化 ［２］ 的 切割位点，则Ａ 的产生会受到干扰 ，抗体识 β β 和复性后，用ＳＤＳＰＡＧＥ、ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等方法对其 别位点正好为ＡＰＰ 分泌酶切割位点序列时则作用 β 检测分析。结果　成功从一株抗人Ａ