结核病实验室诊技术新进展.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * 检测过程 杂交反应 杂交清洗 清洗干燥 扫描检测 数据分析 检测分析 PCR扩增 DNA 提取 样品制备 二、 新诊断技术和方法 （3）Genechip(基因芯片) * 芯片结果图例 芯片杂交质控 芯片制备质控 芯片制备质控 芯片杂交质控 靶基因扩增质控 阴性对照质控 空白对照质控 二、 新诊断技术和方法 （3）Genechip(基因芯片) * * * 二、 新诊断技术和方法 （3）Genechip(基因芯片) 结核耐药检测基因芯片 结核耐药检测芯片获北京市自主创新产品证书 获国家医疗器械证书和欧盟CE认证 样品制备仪 杂交仪 通 量：两个一线抗结核药 速 度： 6 小时（比传统药敏试验法快 50-100 倍） 灵敏度：103 CFU/反应 特异性：对照设计严谨；自动判读 基于rpoB/katG/inhA的基因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌多药耐药（利福平、异烟肼）。 软件判读 激光共焦扫描仪 International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, 13:914-920, 2009（IF=2.3） 是一种半定量巢式实时PCR的检测方法，能检测杆菌和利福平耐药性。扩增出ropB基因含有81bp的核心区序列，探针能够区分野生型基因序列与突变型基因序列。 集样本准备、扩增和实时检测于一体。 盒子中含有冻干的试剂，缓冲液和洗涤液。使用6色激光检测装置对靶核酸进行实时检测。 二、 新诊断技术和方法 （4）GeneXpert( 多色巢式定量PCR)检测技术 * ? 标本类型：临床痰标本，或浓缩处理后的标本（涂阳或涂阴培阳），不能用于用于治疗随访的病人。 ? 对涂阴培阳病人具有非常高的敏感性和特异性 ?可同时检测患者是否结核以及是否对利福平耐药 ? 两小时内即可得到检测结果，所用仪器设备简单 ?不需要生物安全柜，满足涂片试验条件的实验室 ? 二、 新诊断技术和方法 （4）GeneXpert( 多色巢式定量PCR)检测技术 * ? 利福平耐药阴性预测值： 在结核病利福平耐药流行低或高的地区，NPV大于99%.即阴性结果能排除RIP耐药 ?利福平耐药阳性预测值： RIP耐药流行＞15%，PPV＞90% RIP耐药流行5% ～ 10%，PPV：71%～84% RIP耐药流行＜5%，PPV：＜70%，在这种情况下，RIP耐药的结果需要传统的DST证实。 二、 新诊断技术和方法 （4）GeneXpert( 多色巢式定量PCR)检测技术 * 基于核酸扩增的一步法利福平耐药检测 Xpert TM MTB/Rif 技术平台 利福平的耐药性分析 喹诺酮类药物耐药性 HIV 病毒载量分析 自动化得标本处理和检测，可以在2小时内出结果 二、 新诊断技术和方法 （4）GeneXpert( 多色巢式定量PCR)检测技术 * * 结核分枝杆菌菌株水平鉴定最早采用生化分析、血清学技术和噬菌体分型等技术进行分析，但由于这些方法的局限性而未得到广泛应用。 基于核酸基础上的分子流行病学研究技术是对结核病等感染性疾病进行检测的一个强有力的手段，可以进行结核菌传播的研究，结核病实验室交叉污染的研究，判断结核再感染或复发以及国际间传播的研究。 二、 新诊断技术和方法 （5）分子分型技术 * * 简单介绍以下三种分型技术： （1）插入序列 6110 限制性片段长度多态性分析：IS6110 （2）直接重复片段及寡核苷酸多态性分型：间隔寡核苷酸分 型( spacer oligonucleotide typing ,Spoligotyping) （3）分枝杆菌分散重复单元-可变数目串联重复序列： (mycobacterial interspersed repetitive units-variable number tandem repeats, MIRU-VNTR) 二、 新诊断技术和方法 3、分子生物学 （5）分子分型技术 * * 插入序列 6110 限制性片段长度多态性分析： 　　 IS6110是一个只存在于结核分枝杆菌复合群基因组中的插入序列，长度为1355bp，具有高度的保守性，属于IS3家族。不同结核菌株IS6110的数目和位置不同。在IS6110序列中，限制性内切酶PvuII的酶切位点只有一个，经酶切后产生大小两个不同的片段，再与只针对酶切位点右侧的245bp探针杂交，则杂交后产生的条带数即为菌株IS6110拷贝数。 二、 新诊断技术和方法 （5）分子分型技术 * * 插入序