LncRNA h9在非小细胞肺癌中的表达及对细胞的生物学行为的影响.docxVIP

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LncRNA h9在非小细胞肺癌中的表达及对细胞的生物学行为的影响

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应法律责任。 .∥j≮‘≤≯》、fj?I:0·j卜≯,0。?、。 研究生签名:多彩侈导师签章 级学院领导盖毫≯. ≯; 甲纂》∥甲蟹每妇曩膊 7弹 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他入已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名: 导师签章: ≯,岁年叫日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文LncRNAhl9在非小细胞肺癌中的表达及对细胞的生物学行为 的影响 前言HU舌 ..! 9 材料与方法 9 结果 21 附图 24 附表 30 讨论 3l 结论 33 参考文献 33 综述IncRNA在非小细胞肺癌中的研究进展 35 致谢 46 个人简历 ^ 47 万方数据 中文摘要长链非编码RNA 中文摘要 长链非编码RNA h19在非小细胞肺癌中的表达及对细胞的生物 学行为的影响 摘 要 目的:肺部恶性肿瘤是发病率和死亡率增长最快,对人群健康、生活 和生命威害最大的恶性肿瘤之一。根据全国肿瘸登记rm心2014年最新研 究显示,全国男性肺癌的发病率为(1/105)49.27,在所有恶性肿瘤中位居第 一位;女性肺癌的发病率为21.66,在所有恶性肿瘤中位居第二(乳腺癌 25.89)。在全国城市中肺癌的发病率和死亡率为20.48和27.05均位居第 一位;与此同时,在全国农村中肺癌的发病率和死亡率为1 8.50和22.42 也均位居第一位。随着现在科技的进步以及各为研究者的深入研究,虽然 对于肺癌的认识越来越深入,但是在肺癌的防治仍然是我们目前面临的重 大难题。好多肺癌患者在出现临床症状的同时就医,大多数已处于中晚期, 因此研究肺癌的发病机制,寻找肺癌的分子生物学早期诊断指标,探讨肺 癌的治疗靶标,不仅是在临床具有霉要的价值,更重要的是对于社会更有 积极的意义。 肺部恶性肿瘤的从发生到发展是一个逐步积累的过程,一般是由于细 胞生长过程中调控紊乱及生长方式的改变,从而引起细胞发生癌前病变及 基因改变。肺癌的发生是一个积累性的基因损伤,是一个多步骤、多基因 参与的过程,包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活、以及表观调控、转 录水平调控、转录后水平的紊乱,造成细胞组织器官失去原有的性质及作 用对于人体造成损伤。LncRNA是以RNA的形式在多种层面上调控基因的 表达水平,一般而言,越来越多的研究发现lncRNAs广泛参与了基因组 调节,在肿瘤的发生、发展及转移方面起着重要的作用。虽然长链非编码 鼬蛆h19的异常表达与其他肿瘤的发生,包括肝癌、卵巢癌、前列腺癌、 大肠癌、乳腺癌,有着密切的关系u。1,但在非小细胞肺癌中的相关文献 尚不多见。因此,本研究旨在研究长链非编码RNA h19在非小细胞肺癌中 的异常表达对肺癌高危因素的相关性及对癌细胞的增殖、迁移及侵袭的影 响。 方法:(j)收集64例手术治疗患者中,术前诊断为非小细胞肺癌并未接 万方数据 中文摘要受放化疗,术后病理确诊为非小细胞肺癌的崽者,切除的新鲜癌组织及对 中文摘要 受放化疗,术后病理确诊为非小细胞肺癌的崽者,切除的新鲜癌组织及对 应的癌旁组织;并将组织冰盐水中清洗干净并放入液氮中速冻24d,时移至 .80。C冰箱保存。(2)qRLT-PCR榆测64例非小细胞肺癌中h19的表达情况:首 先采用Trizol法提取癌组织及正常组织的总RNA;然后利用琼脂糖凝胶电 泳进行RNA质量鉴定,确保RNA的完整性;再次设计lncRNA h19的反转 录引物以及相应的上、下游引物,并且根据反转录试剂盒说明书的步骤进 行反转录;最后应用qRT-PCR检测长链非编码RNA h19的表达情况。(3)根 据各组的表达情况分析其与肺癌高危因素的相关性。(4)选取肺癌细胞株 A549进行细胞培养。(5)应用TRIZE方法提取非编码长链RNA;利用琼脂 糖凝胶电泳进行对提取的RNA进行质量鉴定;设计lncRNA h19的反转录 引物以及相应的上、下游引物,根据h19基因B.actin基因[81使用引物设计软 件primerprimer5,分别参照GeneBank所刊登序列设计,以内参基因B.actin基 因作为对照;再进行反转录,qRT-PCR

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