质粒提来取和酶切分析.pptVIP

质粒提取和酶切分析 中心实验室 感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数 碱裂解法小量制备质粒DNA 一．实验目的及背景 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 其复制和遗传独立于细菌染色体，但复制和转录依赖于宿主编码的蛋白和酶。 质粒图谱的阅读 复制起始位点Ori? 即控制复制起始的位点。 原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 ?抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+? ，Neo 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段? P/E 启动子/增强子 Terms? 终止信号 加poly（A）信号? 可以起到稳定mRNA作用 质粒图谱的阅读 质粒图谱上有的箭头顺时针有的箭头逆时针，那其实是代表两条DNA链，即质粒是环状双链DNA，它的启动子等在其中一条链上，而它的抗性基因在另一条链上. 质粒特点 质粒能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些表型，是比病毒更简单的原始生命。 质粒通过细菌的结合作用，从雄性体转移到雌性体， 是细菌有性繁殖的性因子. １９５２