miR214通过靶GALNT7抑制宫颈癌细胞的生长和侵袭.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：多种癌基因和抑癌基因的异常表达导致了宫颈癌的发生发展。目前 对其机制的研究已取得一些成果。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类具有调 控功能的非编码单链小RNA分子，它通过与靶基因mRNA的3’非翻译区 (3-untranslated region，UTR)以碱基配对的方式特异性结合，使靶基因翻译抑 制或使mRNA降解。GALNT7是多肽：N．乙酰氨基半乳糖转移酶(polypeptide N—aeetylgalactosaminyltransferase，ppGalNAc—T)家族中的成员，是催化0一聚糖合 成第一步的酶，O．糖基化与细胞识别、肿瘤细胞生长、转移和粘附等功能密切 相关。本实验室前期工作利用cDNA微阵列分析首次发现在HeLa细胞中抑制 miR-214后GALNT7的水平上升。本文将探究miR-214对GALNT7的调控作用， 及其对宫颈癌生物学表型的影响。 方法：首先用生物信息学方法筛选GALNT7为miR．214的候选靶基因，利 用荧光报告载体实验验证miR-214对GALNT7的直接调控作用。通过qRT-PCR 和Western blot方法在宫颈癌细胞系中检测了miR．214对GALNT7的mRNA和 蛋白水平的影响。并用qRT-PCR方法和免疫组化方法在宫颈癌组织及其癌旁正 常组织中进一步验证miR．214对GALNT7的调控关系。然后在宫颈癌细胞系中， 过表达miR一214和封闭miR．214后利用MTT实验、集落形成实验和tanswell实 验检测宫颈癌细胞系表型的变化。利用RNA干扰技术沉默GALNT7来检测细 胞表型的变化。最后用挽救实验验证了miR．214对GALNT7调控的特异性。 结果：miRNA筛选结果表明，GALNT7是miR．214的靶基因，其3’非翻译 区包含miR．214的潜在结合位点。荧光报告载体实验证实miR．214能够通过作 用于GALNT7基因的3’非翻译区对其表达进行负性调节。qRT-PCR和Western blot的结果表明miR-214能够影响GALNT7 mRNA和蛋白的表达水平。与正常 宫颈组织相比，宫颈癌组织内miR．214的表达明显降低，而GALNT7的mRNA 和蛋白水平明显增高。在宫颈癌细胞系中，过表达miR-214后，细胞生长活性 下降、集落形成能力明显降低、迁移和侵袭能力也明显下降；封闭了miR．214 之后结果相反。此外，沉默GALNT7后宫颈癌细胞的增殖活性、集落形成能力 以及迁移和侵袭能力都明显下降。挽救实验中，过表达GALNT7则能抑制 miR-214对宫颈癌细胞的效应。 结论：在此研究中我们验证了GALNT7是miR．214的直接靶基因。 ——． ——． 大津医科大学硕士学位论文 ———————————————————————————————————————————————一一 miR-214在宫颈癌组织中低表达，在宫颈癌细胞中过表达miR．214能够抑制细胞 增殖和迁移侵袭能力，起到抑癌基因的作用。而GALNT7在宫颈癌组织中高表 达，在宫颈癌细胞中能促进细胞增殖和迁移侵袭能力。通过阐明miR-214靶定 GALNT7及其在宫颈癌中的具体作用机制，有利于我们对宫颈癌的发生和发展 有更eXiT解，同时也为宫颈癌的诊断和治疗提供新的依据。 关键词：miR。214 GALNT7宫颈癌细胞增殖细胞迁移细胞侵袭miRNA 天津医科大学硕士学位论文Abst 天津医科大学硕士学位论文 Abst ract Ob j ect i Ve：Cervical cancer is a complex disease involving the abnormal expression of many oncogenes and tumor suppressor genes．Previous studies have revealed several genes associated with human cervical cancer．microRNA(miRNA、iS a class of single—stranded non-coding regulatory small molecule RNA，Can bind to the 3’untranslated regions(3’UTRs)of target mRNAs through base pairing，either preventing their translation or causing target