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三 谷氨酸生产菌及扩大培养 教学内容 1，了解谷氨酸生产菌的主要特征、特点。 2，掌握菌种的扩大培养方法。 3，了解影响生产菌生长的主要因素。 教学目的与要求 学时：4 作业安排 小论文 前言： 一，谷氨酸菌种的选育进展： 1，应用常规育种技术及其所选育的谷氨酸高产新菌种 前言： 2，谷氨酸生产菌抗噬菌株的选育 前言： 3 ，采用遗传工程新技术选育谷氨酸优良菌种 前言： 二，谷氨酸生产菌保存方法 前言： 二，谷氨酸生产菌保存方法 前言： 二，谷氨酸生产菌保存方法 前言： 二，谷氨酸生产菌保存方法 第一节 谷氨酸生产菌的主要特征和菌学性质 一，现有谷氨酸生产菌的分类： 二，现有谷氨酸生产菌的菌学性质： 三，现有谷氨酸生产菌的主要特征： 三，现有谷氨酸生产菌的主要特征： 三、现有谷氨酸生产菌的主要特征（总结） 第二节 谷氨酸生产菌在发酵过程中的形态变化 人们发现，谷氨酸生产菌在发酵过程中会发生明显的菌体形态的变化。实践证明，在发酵过程中发现菌体形态有明显的变化时，正是产谷氨酸的激增时间。但在发酵培养基含有过剩生物素的培养条件下，菌体形态则没有明显变化，却呈现耗糖、长菌、不产谷氨酸的异常发酵。 一、种子的菌体形态 斜面和一、二级种子培养在不同培养条件下,细胞形态基本相似。斜面培养的菌体较细小,一、二级种子比斜面菌体大而粗壮，革兰氏染色深。多为短杆至棒杆状，有的微呈弯曲状，两端钝圆，无分枝；细胞排列呈单个、成对及“V”字形，有栅状或不规则聚块；分裂的细胞大小为0.7～0.9*1.0～3.4um。由于生物素充足，繁殖的菌体细胞均为谷氨酸非积累型细胞。 二、谷氨酸发酵不同阶段的菌体形态 从谷氨酸发酵中菌体形态的变化来看,大致可以分为长菌型细胞、转移期细胞和产酸型细胞3种不同时期的细胞形态。 三、谷氨酸发酵感染噬菌体后的菌体形态 发酵前期感染噬菌体后，菌体细胞明显减少,细胞不规则，发圆、发胖，缺乏“Ｖ”字形排列，有明显的细胞碎片，严重时出现拉丝、拉网，互相堆在一起，几乎找不到完整的菌体细胞,类似蛛网或鱼翅状。 在发酵中、后期感染噬菌体后，菌体细胞形态不规则，边缘不整齐，有的边缘似乎有许多毛刺状的东西，有细胞碎片 。 第三节 谷氨酸生产菌的育种 1，日常菌种工作 第三节 谷氨酸生产菌的育种 育种思路 第三节 谷氨酸生产菌的育种 育种思路 1.切断或减弱支路代谢 2.解除自身的反馈抑制 3.增加前体物的合成 4.提高细胞膜的渗透性 5.强化能量代谢 6.利用基因工程技术构建谷氨酸工程菌株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 2，选育耐高渗透压的菌株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 3，选育不分解利用谷氨酸的突变株：即选育以谷氨酸为唯一碳源菌体不长或生长微弱的突变株。 第三节 谷氨酸生产菌的育种 4，选育细胞膜渗透性好的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 5，选育强化CO2固定反应的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 6，选育减弱乙醛酸循环的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 7，选育强化三羧酸循环中从柠檬酸到a-酮戊二酸代谢的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 8，选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反馈调节的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 9，选育强化能量代谢的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 10，选育减弱HMP途径后段酶活性的突变株 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 一、应用原生质体融合新技术选育谷氨酸生产菌 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 二，应用转化法选育谷氨酸生产菌 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 三，应用转导法选育谷氨酸生产菌 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 四、应用重组DNA技术选育谷氨酸生产菌 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 五、应用固定化细胞技术发酵生产谷氨酸 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 在谷氨酸生产中，依其代谢途径，把不必要的代谢途径 (经诱变阻断了a一酮戊二酸到琥珀酰CoA和乙醛酸两条代谢途径) 切断后，同时诱变出细胞渗漏型甘油缺陷 B 4 ，以便让谷氨酸有效外漏，解除因代谢途径改变后细胞内代谢产物谷氨酸过度积累而产生的反馈抑制，谷氨酸产量有一定提高( 经诱变筛选得到的营养缺陷型突变株 B 4比其出发菌株 B l提高产酸率 18.6 ％ 和对糖的转化率提高 12.3 ％) 。 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.1 ，菌株和质粒 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.2 培养基和培养条件 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.2 培养基和培养