水稻愈伤组织对不同培养基的适应性潮霉素的敏感性及其在遗传转化.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１０）：５０～５４ 水稻愈伤组织对不同培养基的适应性、潮霉素的 敏感性及其在遗传转化中的利用 １ ２ 康海岐 　申国安 （１四川省农业科学院作物研究所　成都　６１００６６　２复旦大学遗传所　上海　２００４３３） 摘要　取粳稻 （ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｊａｐｏｎｉｃａ）品种中花 １１号开花授粉后 １５天的幼胚诱导愈伤组织， 在ＮＤ、ＮＢＤ、ＭｓＤ和ＢＤ４种培养基上比较愈伤组织生长情况，证明３种培养基均可以用于水 ６ ６ ５ ５ 稻愈伤组织的培养，但ＢＤ的效果不如另３种培养基，ＮＤ和ＮＢＤ的培养效果优于Ｍｓ培养基， ５ ６ ６ ５ ＮＢＤ的效果略好于ＮＤ。后续实验主要采用ＮＤ培养基。进一步对愈伤组织的ＨｙｇＢ敏感性 ６ ５ ６ ６ 试验，发现３０ｍｇ／Ｌ的ＨｙｇＢ对愈伤组织生长有明显的抑制作用，５０ｍｇ／Ｌ的浓度对愈伤的生长抑 制作用更彻底，因此认为采用５０ｍｇ／Ｌ的浓度进行抗ＨｙｇＢ的愈伤组织筛选比较可靠。利用上述 结果，在水稻遗传转化方面进行了应用和验证，发现效果比较明显。 关键词　水稻　愈伤组织　培养基　潮霉素 中图分类号　Ｑ９４２．５ 　　组织培养是转基因与基因功能等研究过程中的基 具有重要的技术参考意义。 本工作之一，培养基是其中的关键介质。培养基的类 ［１］ １　材料和方法 型比较多，基本培养基主要有Ｍｓ、Ｎ、Ｂ等 。在实际 ６ ５ 工作中，可对基本培养基进行灵活变通应用，比如将不 １．１　材　料 同元素成份进行组合改变，或添加一些特殊成份［２］，或 　　取粳稻 （ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｊａｐｏｎｉｃａ）品种中花１１号 ［２］ 对基本培养基进行改良 ，以探索出更适合的培养基 （ＺＨ１１）开花授粉后１５天的幼胚诱导愈伤组织，进行培 配比，从而提高培养效果等。另外，通常潮霉素是水稻 养基适应性和潮霉素敏感性试验。植物生长激素２，４ 遗传转化中一种重要的抗性筛选标记，通过实验来研 Ｄ、６ＢＡ、ＫＴ、ＮＡＡ，潮霉素Ｂ（ＨｙｇＢ）、头孢霉素（Ｃｅｆ）、羧 究其对水稻愈伤组织的敏感性，是遗传转化和功能研 苄青霉素（ｃｂ）、乙酰丁香酮（Ａｓ）等购自上海生工生物 究中的技术关键之一，关系到结果的正确性，是实验者 工程公司。 必须明确的基本细节。目前相关的文献报道中，易自 １．２　试剂和培养基 力等以１３个籼稻品种和３个粳稻品种为试验材料，对 　　用无菌水将潮霉素Ｂ配制成５０ｍｇ／ｍｌ的溶液，记 Ｍｓ、ＮＢ和ＣＣ等３种基本培养基对水稻愈伤组织的诱 为ＨｙｇＢ ，以无菌滤器过滤除菌，－２０℃保存待用。将 ［３］ ５０ 导与分化能力进行了研究 ；周玲艳等研究了农垦５８Ｓ ［４］ ２，４Ｄ配制成０．２ｍｇ／ｍｌ的浓度，于４℃保存。 和培矮６４Ｓ对０～６０ｍｇ／ＬＨｙｇ的敏感性 。本文以较 　　配制培