人喉癌移植瘤成纤维细胞的培养、时鉴定及上皮间质转化相关来源分析-耳鼻咽喉科学专业毕业论文.pdf.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝鎏蠢堂或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：主二秒签字日期： 必f石年歹月弓f，日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 迸婆盘鲎有权保留并向国家有关部门或机构 送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝婆盘堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： k 导师虢函1 签字日期：扣c‘年厂月专f日 签字日期：伪f刍年∥月／日 万方数据 浙江大学硕士学位论文致谢 浙江大学硕士学位论文 致谢 岁月如梭，光阴似箭，转眼间我的硕士研究生生涯即将结束。值此论文完成之 际，心中百感交集，难以忘却那些曾经关心、帮助及鼓励过我的人，唯有感激二 字最能够表达此刻我的心情。 最诚挚的谢意当献给我的导师范国康教授。我很幸运能成为范老师的学生，科 研零基础曾让我妄自菲薄，然而范老师非但没有嫌弃而且给了我莫大的鼓励，是 范老师给我带来了进一步学习深造的机会，使我步入一段新的人生旅程。范老师 严谨求实的治学态度和儒雅随和的处世方式是我毕生学习的榜样。他的言传身教 使我在临床和科研方面获益匪浅，并将我从临床工作领进科研领域，学习和掌握 系统的科研思路和科研方法，让我感受到了与临床工作完全不同的另一个微观世 界。从论文的选题、设计、实验、撰写到发表，范老师始终给予我细心的指导和 不懈的支持。 由衷感谢课题组杨蓓蓓老师、林志宏老师、王华林老师、常惠玉老师及段洪刚 博士等对课题的热心指导。 感谢我的工作单位——浙江省嘉兴市第二医院(原单位)和上海中医药大学附 属市中医医院(现单位)，由衷地感谢钱林荣主任、杨雪明主任、郭裕主任及全 科所有同事在我课题研修期间在工作中对我的大力支持，在未来的岁月里，我将 不懈努力，勤奋工作，来回报你们对我的关爱! 特别感谢我的家人，你们无私的付出和支持让我可以抛开家庭的杂念全身心地 完成学业，也是激励我不懈前进的源动力。 最后，衷心感谢参加论文评审和答辩工作的全体专家、老师、同学和工作人员! 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 人喉癌移植瘤成纤维细胞的培养、鉴定 及上皮间质转化相关来源分析 浙江大学医学院 耳鼻咽喉科学 硕士研究生 王媚 导 师 范国康 中文摘要 研究背景 肿瘤的发生、生长和侵袭转移已不能简单归因于肿瘤细胞的基因突变和肿瘤 细胞的失控生长，肿瘤微环境中的多种细胞成分，尤其是肿瘤相关成纤维细胞 (Cancer-associated fibroblasts，CAFs)对肿瘤的生长、侵袭甚至癌变起到至关重要的 调控作用，针对CAFs的靶向治疗已经成为当前抗肿瘤研究新的热点。弄清CAFs 的起源有利于我们更好的设计靶向治疗策略，但是CAFs的起源至今尚未明确。文 献报道的CAFs可能的重要起源之一便是肿瘤细胞能够通过上皮间质转化 (Epithelial—mesenchymal transition,EMT)形成促进自身生长的CAEs，而关于喉癌 组织中的CAFs的起源目前尚未见报道，至于喉癌细胞能否通过EMT这条重要途 径形成CAFs也不明确。 研究目的 验证喉癌裸鼠移植瘤模型中的喉癌细胞能否通过EMT生成促进自身生长的 CAFs。 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 研究方法 1、将喉癌皿p一2细胞系注射到免疫缺陷 BALB／c裸鼠皮下建立喉癌小鼠移植 瘤模型： 2、将所生长的小鼠皮下瘤体取出病理检查，并对瘤体中I举／CAFs进行原代培养、 纯化及相差显微镜观察； 3、对纯化出I均CAFs进行体夕1-55疫荧光、增殖、迁移、侵袭试验及体内促肿瘤 生长功能学鉴定； 4、对鉴定后能／CAFs、NFs及喉癌细胞进行核型分析，即上皮间质转化相关来 源分析； 5、原代培养的癌旁正常成纤维细胞(Nonnal fibroblasts，NFs){g为实验对照。 研究结果 1、喉癌HEp一2细胞系在BALB／c裸鼠皮下成功建立喉癌移植瘤模型； 2、所生长的瘤体为典型的喉鳞状上皮癌，瘤体中的CAFs被成功原代培养及 纯化； 3、免疫荧光检查发现CAFs及NFs均为波形蛋白(vimentin)阳性而广谱角蛋白 (