第十六章药物分析中新技术新方法.pptVIP

手性分离色谱 柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。 常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。 五、应用1．对某些手性药物进行对映体的纯度检查；2．生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系；3．在研制手性药物过程中，可分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应、药动学性质；4．必要时，可进行手性药物对映体的制备分离（或拆分）。 核磁共振光谱分析法   核磁共振光谱广泛用于化合物的结构分析，而其在化合物的定量分析中的应用则是比较新的内容，日益受到重视。 1．定量参数：峰面积或峰高。2．定量的特点：1）对于确定的核（质子），其信号强度与产生该信号的核（质子）的数目成正比，而与核的化学性质无关。2）利用内标法或相对比较法分析混合物中某一化合物时，物需该化合物的纯品作为对照标准。 3）峰很窄，远小于各化合物之间的化学位移的差值，因而混合物中不同组分的信号之间很少发生明显的重叠。4）方法简单快速、准确、专属性高，不破坏被测样品，可选择性的测定混合药物或药物制剂中的组分乃至药物的立体异构体。 3．测定方法：选择一个合适的峰作为测量峰。（1）内标法（绝对测量法） 内标法为NMR定量分析最常用的方法，它与GC的内标法相似，在样品溶液中，直接加入一定量内标物质后，NMR光谱测定，将样品指定基团上的质子引起的共振峰面积进行比较，当样品与内标均经精密称重时，则样品的绝对重量（Wu）可由下式求得： （2）相对测量法 当不能获得样品的纯品或合适的内标时，可用相对测量法进行分析。操作方法与内标法相同。计算相对含量是以指定基团上一个质子引起的吸收峰面积（A1 / n1）和杂质基团上一个质子引起的吸收峰面积（A2 / n2）进行比较，按下式计算： （二）主要分离模式 1. 毛细管区带电泳（CZE） 2. 胶束动电毛细管色谱（MECC） 3. 毛细管凝胶电泳（CGE） 4. 毛细管等电聚焦（CIEF） 等电点 两性电解质 CIEF 分子大小和 荷电数目 凝胶－缓冲溶液 CGE 疏水性/离子性 相互作用 胶束－缓冲溶液 MECC 离子淌度 自由缓冲液 CZE 分离机理 缓冲液体系 模式 毛细管区带电泳 最基本、最广泛的分离模式。 适用于所有具有不同淌度的荷电粒子的分离，但不能中性物质及质荷比相同的组分。 2. 胶束动电毛细管色谱 用离子胶束溶液代替简单的缓冲溶液，使中性组分可按其疏水性的不同及在两相间的分配系数的不同而分离。采用手性分配相，可用于手性化合物的分离。 3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具有分子筛的作用，可分离质荷比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化学上有着十分广泛的应用。 4. 毛细管等电聚焦 根据蛋白质的等电点不同而进行分离。 A A A A A A B B B B B B C C C C D D D D D E E E E E F F AA AA BB BB CC CC DD DD EE EE FF FF pH梯度 高 低 应用： 1. 监测药物生产过程 如：监测青霉素发酵液中有关物质的量 青霉素发酵液的高效毛细管电泳图 1. 青霉素G钠 ；2. 6-APA ；3. 对羟基苯乙酸 ； 4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸 2. 中药成分分析 如：黄酮及其甙类分析 黄芩中6种黄酮类成分的 胶束电动毛细管色谱分离图 1.汉黄芩甙；2. 黄芩素；3.黄芩甙；4. 千层子素；5. 汉黄芩素；6.内标水杨酸；7.白杨素 3. 手性拆分 4. 体内分析 质谱法及其应用 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 控制和数据处理系统 真空系统 一、离子源及离子化技术 1、EI（电子轰击离子化） V 加速电压 试样蒸汽 阴极 阳极 电子束 离子 x y z 电子轰击质谱示意图 优点： 灵敏度高，有丰富的碎片离子信息和成熟的离子开裂理论，是结构分析、鉴定的有力手段；重现性好，有标准图谱，可以通过谱库检索对未知物进行结构鉴定。 缺点： 样品须汽化后才可离子化 适用化合物： 易挥发、热稳定化合物。 2、CI（化学离子化） 软电离技术 优点： 可以得到较强的准分子离子峰，有利于分子量的测定