大肠杆菌表达系统.PDFVIP

活性蛋白整体方案 Active Protein Solutions 大肠杆菌表达系统 大肠杆菌蛋白表达原理 诱导原理 ：Lac 阻遏物是一种具有 4 个相同亚基的四级结构蛋白 ，都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在 时 ，lac操纵子 （元 ）处于阻遏状态 ，Lac 阻遏物能与操纵基因O结合 ，阻碍 RNA 聚合酶与 P序列结合 ，抑制转 录起动。而当有诱导剂与阻遏蛋白结合后 ，其蛋白构象就发生变化 ，导致阻遏物从操纵基因O上解离下来 ，RNA 聚合酶不再受阻碍 ，发生转录。详情见 IPTG诱导蛋白表达的原理 大肠杆菌表达系统步骤 不包括基因构建等上游操作和蛋白纯化部分。基因构建参考密码子优化 ，蛋白纯化参考蛋白纯化专题。以下内容主 要包括蛋白表达鉴定 ： 1. 表达鉴定第一天的任务 ，常用抗性选择根据感受态细胞选择  拿到质粒 ，离心 （3000r/min ；2min ）  在质粒中加入 TE （使质粒最终加入到 110μL感受态细胞