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Chapter 2哺乳类生殖生物学基础 2.1. 基本概念 配子：精子 sperm, 卵母细胞（卵子） oocyte (egg) 受精卵 胚胎 embryo 胎儿 fetus day 11 (Mouse) after 9 wk (human) 生殖内分泌学 生殖生理学 Reproductive Endocrinology ♀ 发情周期 Physiology of Reproduction 1、雄性生殖器官与精子（sperm） Sperm and sperm vector 2、Female reproductive organs 3、Ovary 冷冻与移植 Mouse: Sztein et al, 1998; Jackson Lab; Shaw et al, 2000; Manipulating the mouse embryo, 3rd eds cow：Shaw et al, 2000; Agca Y, 2000 Sheep: Salle et al, 2003 mouse Traditional opinion: 在卵子发生过程中，卵泡细胞养育卵母细胞 卵泡细胞通过排卵发生将卵母细胞输送到输卵管中 Recent Studies： 卵泡发生过程中，卵母细胞具有主动的关键作用 卵母细胞与卵泡细胞间建立的双向通信，是卵子的获得受精力，以及早期胚胎发育是必需的 卵母细胞中mRNA的储存 卵母细胞的IVM(in vitro maturation) Media Hormone Growth Factor aa 卵子形态结构 Zona Zona 小鼠透明带 ZP1：维持透明带的立体结构。 ZP2: 精子第二受体。 ZP3：精子第一受体、诱导精子的顶体反应。 主肽链402aa, 44KD, 3-4条N-oligos (稳定蛋白质结构，防止内源性酶的降解)， 6条丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）连接的O-oligos. 编码基因：5号染色体，单拷贝，8个exon，exon 7 高度变异，由其编码的25个氨基酸残基及其糖基化位点决定了受体功能和透明带反应，保证了受精过程的种间特异性。 ZP3的生物学功能之一 主肽链诱导精子发生顶体反应 O-oligos末端的非还原性单糖（可能为?-半乳糖或N-乙酰葡糖胺），参与识别精子表面的透明带结合蛋白（ZBP，zona binding protein），介导透明带与精子的第一次结合，行使精子受体的功能。 ZP3的生物学功能之二 Zona reaction and block sperm penetration technique of retroviral vector 5、Fertilization Step 3. 识别和融合 卵母细胞的激活变化 融合后的变化：“ 唤醒”卵母细胞，完成周期 形态：PB2的排出、精子核膜崩解、精子染色体去浓缩、雌雄原核形成、双原核向卵中央迁移、原核核膜崩解，进入第一次有丝分裂。 生理： 〔Ca2+〕升高和/或Ca2+振荡、受精膜电位的形成、 pH值升高 生化：母源mRNA的翻译、功能蛋白的修饰、细胞周期因子的活性变化、DNA合成的启动。 卵母细胞激活的关键 胞内游离〔Ca2+〕升高是关键信号 钙池中Ca2+动员的模式Ca2+振荡 胞外Ca2+的流入是维持Ca2+振荡必需的 Ca2+振荡时， Ca2+泵动员1个Ca2+将耗掉1～2 ATP，生物体采用这样一个效率低下的信号机制，意义何在？ 精子激活卵母细胞的初始信号 受体假说 激活因子假说 PIP2. 磷脂酰肌醇酯；PLC.磷脂酶C；IP3.三磷酸肌醇；DAG.甘油二酯 PIP2. 磷脂酰肌醇酯；PLC.磷脂酶C；IP3.三磷酸肌醇；DAG.甘油二酯 Further change: pronuclear formation and PB2 extrusion Microinjection Mice without a father In mammals, genomes from both parents are generally needed to make viable offspring. But changing the expression of ‘imprinted’ genes can render the father’s contribution dispensab