帖航,乳糖操纵子.ppt

乳糖操纵子的结构及其正负调控 天津商业大学 生物工程类1002班 帖航 一.乳糖操纵子的提出 二、乳糖操纵子的基本组成 结构基因群 启动子 操纵区 调控基因 终止子 二、乳糖操纵子的表达调控 1. 阻遏蛋白的负调控 2. CAP的正调控 Summary 正调控与负调控并非互相排斥的两种机制，而是生物体适应环境的需要 * * * 大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖，当培养基中含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先利用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间的适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。 葡萄糖效应（葡萄糖阻遏或分解代谢物阻遏作用 ），大肠杆菌的2次生长。 这种典型的诱导现象，是研究基因表达调控极好的模型。针对大肠杆菌利用乳糖的适应现象，法国的Jocob和Monod等人做了一系列遗传学和生化学研究实验，于1961年提出乳糖操纵子（lac operon）学说，在1965诺贝尔医学生理学奖。 Fran?ois Jacob Jacques Monod 乳糖操纵子：核酸分子上调控基因转录活性的基本单元，由调节基因、启动子（P）、操作区（O）、结构基因、和终止子和组成。 操纵子中被调控的编码蛋白质的基因称为结构基因(structural gene, SG)。每个结构基因是一个连续的开放阅读框(open reading frame), 5’端有起始密码ATG，3’端有终止密码TAA、TGA或TAG。 Z基因5’侧具有大肠杆菌核糖体识别结合位点（RBS）特征的Shine-Dalgarno(SD)序列。由于ｚ、ｙ、ａ三个基因头尾相接，因而同一个核糖体能沿此转录生成的多顺反子（polycistron）mRNA移动，一气依次合成这基因群所编码所有的蛋白质。 ｚ基因长3510bp，编码含1170个氨基酸、分子量为135,000的多肽，以四聚体形式组成有活性的β-半乳糖苷酶，催化乳糖转变为别乳糖(allolactose)，再分解为半乳糖和葡萄糖； ｙ基因长780bp，编码有260个氨基酸、分子量为30,000的半乳糖透过酶，促使环境中的乳糖进入细菌； ａ基因长825bp，编码275氨基酸、分子量为32,000的转乙酰基酶，以二聚体活性形式催化半乳糖的乙酰化。 启动子(promoter, P)是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。操纵子至少有一个启动子，一般在第一个结构基因5＇侧上游，控制整个结构基因群的转录。 　　 操纵区（operator）是指能被调控蛋白特异性结合的一段DNA序列，当调控蛋白结合在操纵子序列上，会影响其下游基因转录的强弱。 Promotor: -84---+ 1 Operator: -7---+28 两者有7bp重叠，使这段序列可能无法同时结合RNA聚合酶和阻遏蛋白，也可能虽然可以同时结合，但无法形成开放的转录起始复合物 调控基因(regulatory gene)是编码能与操纵序列结合的调控蛋白的基因。调控蛋白有： 阻遏蛋白(repressive protein)：与操纵区结合后能减弱或阻止其调控的基因转录，其介导的调控方式为负调控(negative regulation), ； 激活蛋白(activating protein)（或无辅基诱导蛋白（apoinducer) ）：与操纵区结合后能增强或起动其调控的基因转录，所介导的调控方式为正调控(positive regulation)。 乳糖操纵子中，调控基因lac I位于Plac邻近，有其自身的启动子和终止子，转录方向和结构基因群的转录方向一致，编码产生由347个氨基酸组成的阻遏蛋白R。 终止子（terminator，T）是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列。在一个操纵子中至少在结构基因群最后一个基因的后面有一个终止子。 终止子都在结构基因的附近，只能对同一条DNA链上的基因表达起调控作用，这种作用在遗传学实验上称为顺式作用（cis-action），启动子、操纵子和终止子就属于顺式作用元件（cis-acting element）。 　　调控基因可以在结构基因群附近、也可以远离结构基因，它是通过其基因产物──调控蛋白来发挥作用的，因而调控基因不仅能对同一条DNA链上的结构基因起表达调控作用，而且 能对不在一条DNA链上的结构基因起作用，在遗传学实验上称为反式作用（trans-action），调控基因就属于反式作用元件（trans-acting element），其编码产生的调控蛋白称为反式