实验五植物细胞骨优架观察.pptVIP

油镜的番茄表皮细胞的胞间连丝 实验五 植物细胞骨架显示与观察 问题 1、什么叫细胞骨架？ 2、广义的细胞骨架指什么？ 3、狭义的细胞骨架又指什么？ 4、20-25nm_______;6-7nm___________ 8-11nm______ 一、目的与要求 1、了解植物细胞骨架制片方法和其成分显示的原理 2、掌握考马斯亮蓝R250染色方法 3、观察细胞骨架在细胞中的分布情况 二、原理 细胞骨架指细胞质中纵横交错的纤维网络结构。可分为微管、微丝和中间纤维，它对细胞形态维持、细胞生长、运动、分裂、分化和物质的运输等起着重要的作用。当细胞用适当浓度的Triton-X-100处理时，可将质膜中和细胞内蛋白质溶解，而骨架系统的蛋白质不被破坏，经固定和考马斯亮蓝R250染色后，可使骨架蛋白着色而被显示。 三、材料、器材与试剂 1、材料 新鲜洋葱鳞茎的内表皮2、器材 滴管、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、10mL小烧杯、显微镜、恒温水浴锅等 3、试剂 1）M－缓冲液 ： 咪唑（pH6.7）50mM、MgCl 2 0.5mM、KCl 50mM、EGTA[乙二醇双（α－氨基乙基）醚四乙酸] 1mM、 巯基乙醇或DTT（二硫苏糖醇）1mM、EDTA 0.1mM   四、实验步骤 1、取材：内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。 2、抽提：吸去PBS缓冲液，取2ml 1%Triton-100入小烧杯中，置于37℃恒温水浴锅中保温30min。 3、冲洗：吸去1%Triton- X-100，用M缓冲液轻洗三次， 每次5min。　 五 、实验结果 绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。   六、讨论 1．对实验结果的分析2．实验中的注意事项和关键步骤 七、实验报告与值日 * * 2）磷酸缓冲液（PBS） 3）1%Triton-X-100（用M－缓冲液配制 ） 4）0.2%考马斯亮蓝R250 ： 考马斯亮蓝R250 0.2g、甲醇 46.5mL、冰醋酸7.0mL、蒸馏水 46.5mL 5)植物细胞固定液： 5ml 38%甲醛、 5ml冰醋酸、90ml 70%酒精和5ml甘油 4、固定：加植物固定液2ml固定30min 5、冲洗：弃去固定液后，用PBS缓冲液清洗三次，每次1-2min 6、染色：吸去PBS，滴1滴0.2考马斯亮蓝R250染液染色5min 7、制片：倒去染液，用蒸馏水清洗三次，将标本平铺在载玻片上，再盖上盖玻片。 8、观察 *