国内原发性肝癌的中医药动物实验采用的组方和方法课件.ppt

中成药 活血化瘀： 大黄螫虫丸、鳖甲煎丸 健脾理气： 益气免疫冲剂（四君子汤加减） 清热解毒，消癥散结： 清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等） 解毒散结、活血化瘀： 鳖甲煎丸和大黄蛰虫丸联合蟾蜍制剂 疏肝理气，化瘀通络，健脾和胃： 肝康宁 （成分：螺旋藻粉、菊花、陈皮、山楂） 解毒，消肿，止痛： 华蟾素（成分：干蟾皮提取物 ） * 18年 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 不同治则对DEN诱发大鼠肝癌作用的比较研究 动物造模及分组：Wistar大鼠，雄性，体重100—120g，自由饮用60 — 80ppm DEN水溶液，直到24周末实验结束。将70只大鼠随机分为7组，每组10只，分别为正常组、模型组、西药组、全方组、清热组、活血组、健脾组。西药组加用西药FT- 207；全方组加用清热解毒、活血健脾理气中药，全方由清热、活血、健脾方合并而成；清热组用清热解毒中药，清热方由半枝莲、白花蛇舌草等组成；活血组用活血化癖中药，活血方由桃仁、丹参等组成；健脾组用健脾理气中药，健脾方由黄芪、白术等组成。 中药的制备与给药方法：中药水煎剂按2：3比例兑入乙醇，4°C静置48h，过滤，浓缩至1ml含2g生药，4°C存放。FT- 207用双蒸水溶解，4°C存放。各组药物均于下午19时加入饮水中给药。剂量均为成人单位体重的10倍量。 不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的研究 * 18年 肝癌动物模型 二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌： 取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25轓水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。 共约4个月可诱发成肝癌。或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。 4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌： 2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发大鼠肝癌： 亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌： * 18年 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究 药物制备：取大黄螫虫丸(上海雷允上药业有限公司提供，生产批号:040501)置煎煮容器内，加适量的冷水浸泡1～2h，煮沸30 min，过滤。药渣加3～5倍量水继续煎煮，煮沸20 min，过滤。合并两次滤液，于水浴上浓缩成相当于原生药材1g/mL的药液，冷却装人灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。 实验方法 造模方法：无菌条件下取生长7～9 d传代接种的H22细胞株，将细胞5x106接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。 动物分组及给药方法：小鼠30只，10只作为正常组，其余均按上法造模。小鼠接种肿瘤5d后，随机分成对照组和实验组，每组10只，对照组予以生理盐水处理，实验组给予大黄蛰虫丸水煎液1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0. 2 mL/只，连续给药15 d。 * 18年 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制 选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药，并与补益代表药黄芪进行比较 将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组) 。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天，冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、15、15 g·k g-1·d-1的剂量灌胃给药，连续12 d；热休克组小鼠以43℃热处理20m i n，每4天1次，共 3次；模型组不予任何处理。12 d 后处死小鼠．分别抽取腹水制片，光镜下观察细胞形态，并采用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8 +T细胞表达。 * 18年 这些实验研究中存在的异同 肝癌小鼠造模的不同 给药方式的不同 抑癌扶正行气活血方(半枝莲、白花蛇舌草、桃仁、丹参、黄芪、白术等),清热方(半枝莲、白花蛇舌草等)、活血方(桃仁、丹参等)、健脾方(黄芪、白术等)。采用标准的水煎醇沉工艺制备的中药及西药加工混合于喂养大鼠的颗粒饲料中，作为一种治疗方式。 用清热解毒、活血化安和健脾益气方药治疗时，将中药水煎剂提醉、过滤、浓缩后加入饮水中给药。 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0. 2 mL/只，连续给药15 d。用清热解毒、疏肝理气、活血化瘀治法组方时，可以通过采用灌胃的给药方式。 肝康宁和华蟾素可用局部注射的给药途径。 * 18年 国内原发性肝癌的中医药动物实验研究的治法与临床异同 动物实验 临床试验 同 清热解毒：半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草 活血化瘀：大黄螫虫丸，莪术、三棱、郁金、