3细胞破等碎分离.pptVIP

* 1) 生物法（酶溶法 Enymatic lysis) 生物法是利用溶解细胞壁的酶处理细胞，使细胞壁受到破坏后，再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜。 A.外加酶法 常用的溶酶 溶菌酶、 β-1，3-葡聚糖酶、 β-1，6-葡聚糖酶、 蛋白酶、 甘露糖酶、 糖苷酶、 肽键内切酶、 壳多糖酶 * 特点是专一性强，因此在选择酶系统时，必须根据细胞的结构和化学组成来选择。 溶菌酶（lysozyme)能专一性地分解细胞壁上肽聚糖分子的β-1,4糖苷键，因此主要用于细菌类细胞壁的裂解。 革兰氏阳性菌悬浮液中加入溶菌酶，很快就产生溶壁现象。 放线菌的细胞壁结构类似于革兰氏阳性菌，以肽聚糖为主要成分，所以也能采用溶菌酶， 酵母和真菌由于细胞壁的组分主要是纤维素、葡聚糖、几丁质等，常用蜗牛酶、纤维素酶、多糖酶等。 植物细胞壁的主要成分是纤维素，常采用纤维素酶和半纤维素酶裂解。 * 有时采用几种酶的混合物会产生更好的效果，加入时需确定相应的次序。 对酵母细胞采用酶法破碎时 （1）先加入蛋白酶溶解蛋白质-甘露聚糖结构， （2）再加入葡聚糖酶溶解葡聚糖层， （3）最后只剩下原生质体，这时若缓冲液的渗透压变化，则细胞膜破裂，释出胞内产物。 * B.自溶作用 自溶作用是酶溶解的另一种方法，利用生物体自身产生的酶来溶胞，而不需外加其他的酶。 在微生物代谢过程中，大多数都能产生一种能水解细胞壁上聚