从动物肝组织中分离、提取、纯化但和鉴定一种酶.pptVIP

* * 组员：孙鹤、林哲闽、姜运秋、吴丽媛 一.材料的选择 因动物肝脏中的酶往往结合较多的脂质、核酸的物质，所以取饥饿24小时的动物肝脏为实验材料。 目的酶：由三种不同的亚基组成，为结合酶，pl=6.2 二.材料的处理 细胞破碎 机械破碎法 粗处理时可将肝脏用剪刀剪成小块 使用匀浆法时应先将大块的组织或者细胞团用组织捣碎机或研磨器械捣碎分散。 物理破碎法：冻融法、渗透压法和超声波破碎法均可。 使用冻融法应注意不能在过高的温度下操作，以免引起酶的变性失活。 化学破碎法：常用的化学试剂有：① 有机试剂② 表面活性剂③ 螯合剂等。他们都可以增加细胞膜的通透性，使酶容易释放。 2.防止蛋白酶的水解作用： 预防的措施是加入蛋白酶抑制剂。常用的丝氨酸蛋白酶抑制剂有苯甲基磺酰氟（PMSF）、二异丙基氟磷酸；金属蛋白酶抑制剂有EDTA和EGTA（乙二醇四乙酸） 3.除核酸： 一般微生物和植物的粗酶液中有大量的核酸污染。除核酸的常用方法是沉淀法，沉淀剂的选择需要大量的试验来选定，已知的有1%~2%的链霉素硫酸盐、PEG、溶菌酶等。 三.酶的提取 1.常用方法：盐析法 蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋