电镜操作可注意事项.pptVIP

扫描电镜样品的制做与观察 解放军总医院骨科研究所 黄靖香 目的 随着组织工程技术的发展兴起，如支架材料 的制作后，需观察样品中的孔径大小 ，与细 胞的相融性，生长形态变化等。用扫描电镜 观察获得清晰图像，是重要的检测手段之一。 电子显微镜分透射和扫描电镜两种，透射电 镜（TEM）是观察样品中的内部结构：如细 胞器等；扫描电镜（SEM）可观察样品中的 表面形态结构。 扫描电镜的优点 景深长，视野广，图像呈三维立体结构，样 品制作较透射电子显微镜简单，功能多，根 据样品性质不同，其处理方法也有所区别， 下面主要介绍组织工程支架、细胞、细胞外 基质等样品的制作技术。 一. 样品制作处理步聚 取样→清洗→第一次固定（戊二醛）→第二 次固定（锇酸）→缓冲液中漂洗→梯度脱水 →醋酸戊酯置换→临界点干燥（改成六甲基 二硅胺烷HMDS代替临界点干燥）→表面喷 镀→扫描电镜中观察。根椐我们的具体情况 加以改进。 1. 材料准备、液体配制： 1）玻璃器皿需泡酸、蒸溜水清冼后灭菌备用。 2）磷酸缓冲液（PBS-0.1M PH-7.4）配制：磷 酸二氢钠2.964g , 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水 1000ml，也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。 3）固定液的配制：用PBS缓冲液配成2.5%戍 二醛和1%的四氧化锇。 2. 取材准确、固定及时：尽可能保存原貌， 大小适宜（10mm2