初始污染菌检查.ppt

* * * * 生物学检查 初始污染菌检查 空气中细菌总数检测方法 物体表明和生产人员手细菌总数检测方法 微生物学检查 无菌检查 微生物限度检查 细菌、真菌数量 控制菌 其他（初始污染菌） 初始污染菌检测 指标含义（！） 通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。 初始污染菌检测 目的：保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。 引用标准： GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准 中华人民共和国药典2010版 附录 微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品）生产企业中生产、装配、包装车间（空气中细菌总数检查方法）等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。 检测环境 和检验量 在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作 各类产品每批随机抽样10件样品（10个包装） 方法主要步骤 采样 供试液制备 培养 菌落计数 初始污染菌检测 采样方法 供试液制备 供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。 2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。 3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。 4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2010年规定进行) 5. 对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后 取样。 6. 对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液（1ml/10cm2）冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。 初始污染菌检测 梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1:10 1:100 1:1000 检验方法 将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……） 初始污染菌检测 结果计算公式： 平均菌落数×稀释倍数菌数 菌数/每件次（或g） =——————————————————— 件次或重量（g） 注意事项： 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。 应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。 产品初始污染菌数限值： 灭菌产品管道类内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g） 初始污染菌检测 供试液制备 推荐的制备方法 样 品 制 备 供试液制备 梯度稀释 加 样 用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。 供试液10倍递减稀释。 尽量避免丝线等杂物的混入。 （1）每个稀释级各吸取1ml至每个灭 菌平皿，每个稀释级注5个平皿。 （2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀释液（灭菌生理盐水）灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。 纱布模拟 培养 琼脂凝固后，倒置，37 ℃培养48h 细 菌 计 数 基本概念 细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。 限制条件 平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下： ⑴以菌落数为基础。 CFU(colony forming units):一个菌落就是一个细菌形成单位，它 可以由一个也可以由多个菌细胞形成。 ⑵受特定培养基和培养条件限制。 ⑶有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。 细菌计数 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助