高分子络合树酯固定化多酚氧化酶的研究.PDFVIP

·434 · 生物化学与生物物理进展　　Prog.Biochem.Biophys.　　　　　2000;27 (4) 因子介导的, 其中就包括表皮生长因子.在肿瘤生长、 关 分子.从噬菌体文库中筛选药物靶分子的 抗剂和激动剂 节炎等疾病中, 表皮生长因子参与了其中的血管生成作用, 已被证明是一种有效的方法.以表皮生长因子作为药物靶 抗表皮生长因子介导的血管生成就有可能对与其相关的 分子, 从多肽噬菌体文库中筛选与表皮生长因子结合的噬 疾病起到治疗作用, 因此, 表皮生长因子的 抗剂可能具 菌体多肽, 这些潜在的表皮生长因子 抗剂先导分子经过 有重要的临床价值. 抗表皮生长因子的作用可以通过许 优化可能具有重要的临床价值. 多途径, 其中之一就是找到能与表皮生长因子结合并能干 关键词　噬菌体展示, 多肽, 表皮生长因子, 药物靶分子 预其与受体结合的分子, 因而表皮生长因子可作为药物靶 学科分类号　Q75, Q78 高分子络合树酯固定化多酚氧化酶的研究 1) 雷福厚 　杨再环　石晓红 (广西民族学院化学系, 南宁 530006) 2+ 摘要　为探索新的固定化酶方法, 以漆酚-酪氨酸树酯为固定化酶载体, 与Cu 络合制备成高分子络合剂, 对多 酚氧化酶固定化, 实验结果表明, 这种固定化方法是可行的.固定化多酚氧化酶的适宜 pH 值为6.64 和7.17, 在60 ℃放置25 min 后活力保留50.7%, 以邻苯二酚为底物的米氏常数为1.49×10-2 mol/L, 较游离酶略小.根 据实验结果提出了固定化酶模型. 关键词　高分子络合树酯, 多酚氧化酶, 固定化 学科分类号　Q55 　　我国固定化酶的研究比较活跃, 出现了一些独 应, 预聚 1h 后, 加入酪氨酸和硝基苯溶剂, 温度 [1] 特的固定化技术 , 常用的物理吸附法、包埋法、 升至50℃继续反应2 h, 加阻聚剂使催化剂失活, [2,3] 交联法、共价法现已有许多研究 , 但也存在一 蒸出溶剂, 用热水反复洗涤, 80℃干燥.将粗产品 些缺点, 需要探索新的固定化酶方法和开发高效固 装柱, 用沸水回流洗涤2 h, 再用乙醇回流洗涤 定化酶载体.漆酚 (urushiol)是天然产物生漆的 1h, 除去聚合物中的小分子物质, 然后干燥, 得到 主要成分, 是3 位有15 个碳原子的邻苯二酚化合 漆酚-酪氨酸功能基树酯 (urushiol tyrosine resin, 物, 我们曾以漆酚为原料合成了一系列功能基聚合 UTR). 物, 能作为络合树酯络合金属离子和固定化酶的载 1.3 　多酚氧化酶的提取 [4,5] 体 , 为进一步改进载体的性能, 探索高分子络 　　取市售香蕉果肉约300 g, 用捣碎机捣碎成糊 合剂对酶的固定化方法, 本文将酪氨酸接枝到漆酚 状, 移入烧杯, 加入缓冲溶液, 充分搅拌, 抽滤, 树酯上, 制备成漆酚-酪氨酸铜高分子络合剂, 对 滤液中加入硫酸铵, 使之浓度为0.35 g/ml, 抽滤, 多酚氧化酶进行固定化, 并探讨这种方法的可 滤液中再加硫酸铵至饱合, 沉淀过滤, 为进一步纯 行性. 化酶, 将沉淀用蒸馏水溶解, 再加丙酮, 沉淀抽 滤, 所得凝胶状沉淀即为多酚氧化酶, 低温保存备 1　材料与方法 [6] 用 . 1.1　主要试剂与仪器 1.4 　活性碳对多酚氧化酶的固定化 　　漆酚:将生漆用沸程为60 ℃