实验五 粪标本的微生物学检验.pptxVIP

实验六;;粪便标本的采集与处理： 自然排便采集法：自然排便后，挑取粪便2～3克于无菌的容器内送检。应尽可能取有脓血、粘液的标本。 肛拭子法：不易获得粪便的患者或作厌氧菌培养时，常采用此法。将无菌棉拭子用无菌生理盐水湿润后，插入肛门约4～5厘米（幼儿约2～3厘米）处，轻轻旋转，擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管内送检。除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。 疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本；疑似伤寒患者应在发病2～3周内采集粪便标本。 若疑为霍乱患者，标本应置碱性蛋白胨水中。 若疑有耶尔森菌或弯曲菌等，标本应置卡～布运送培养基送检。 粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中或保存于冰箱内（勿超过2h） ;种 类;粪便标本的检验程序;注：①GN增菌液、亚硒酸盐增菌液用于志贺菌、沙门菌的增菌。 ②直接涂片只适应于疑为霍乱、肠结核及伪膜炎肠炎患者。;亚硒酸盐增菌液： 本培养基中的0．4%亚硒酸钠可抑制革兰氏阳性菌的生长，对革兰氏阴性菌也有毒性，但磷酸钠有中和此毒性的作用，能使肠道致病菌迅速繁殖。磷酸氢二钠与磷酸二氢钠有缓冲作用，有利于肠道致病菌生长。 ;SS平板：是专用志贺菌、沙门菌分离培养用的一种强选择性培养基。 胆盐能抑制革兰氏阳性菌生长，煌绿抑制大肠杆菌的生长。促进志贺菌、沙门菌生长（对胆盐和煌绿等染料有抵抗力）。 胆盐、枸橼酸钠及硫代硫酸钠在一定比例时发挥联合抑菌作用。 硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌、沙门菌的有害作用并中和煌绿、中性红的毒性作用。 本培养基除抑制肠球菌、革兰氏阳性菌外，还可抑制大部分大肠艾希氏菌、产气肠杆菌等革兰氏阴性菌，对志贺菌、沙门菌也有轻度的抑制作用。 由于该培养基抑制杂菌的能力强，故可以增加粪便接种量而获得较高的阳性分离率。 ;实验器材： 1、标本：已增菌模拟粪便标本1#、2#、3#、4#、5#。 2、培养基：SS、MaC、 KIA、蛋白胨水、枸橼酸盐斜面、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸盐蛋白胨水、甘露醇半固体培养基。 3、试剂：革兰染液、氧化酶试剂、3%H2O2、靛基质试剂、甲基红试剂、10%FeCl3、硝酸盐还原试剂甲液、硝酸盐还原试剂乙液。 4、诊断血清： 志贺菌属：志贺菌四种多价诊断血清、福氏志贺菌多价诊断血清、宋内氏志贺菌单价诊断血清。 沙门菌属：A—F群多价O血清、O因子血清（O2、O4 O9）、H因子血清（Ha Hb Hd）、Vi血清。 ;实验方法： 一、分离培养 用无菌方法将1#、2#、3#、4#、5#模拟粪便标本分别划线接种于SS、Mac上，置35℃培养18～24小时。 ;二、结果观察： １、菌落形态描述: 分别描述1#、2#、3#、4#、5#标本在SS、Mac上的菌落形态。（可疑菌落与正常菌群菌落分别描述） 2、革兰染色： 3、触酶试验： 4、氧化酶试验： 5、细菌分纯：挑取生长于SS平板、MaC平板中的可疑菌落3～5个分别接种3～5支KIA。37℃培养18—24小时后，观察结果。 ; KIA 菌名;五、血清学试验: 沙门菌属：如生化反应符合沙门氏菌属，则可按下述步骤进行血清学诊断： 1、先用A—F群O多价血清作玻片凝集试验（做生理盐水对照, 看有无自凝） 2、A—F群O多价血清凝集则用O因子血清定群： O抗原有许多组成成分，有的是一种菌所独有的，有的是几种菌共有的。将具有相同菌体抗原的沙门氏菌归属于同一组（群）。故O因子血清只能定群。 3??A—F群O多价血清不凝集，做Vi因子血清凝集。如果凝集，需用生理盐水制成浓稠菌悬液后隔水煮沸15～30分钟，再做凝集试验。（新分离的伤寒及丙型副伤寒常带想此抗原。） 4、按照确定的O群分别用H因子血清检查H抗原。 ;志贺菌属：若生化反应结果相符，则作玻片凝集反应： 1、做生理盐水对照, 看有无自凝。 2、用志贺氏菌属4种多价血清反应，若有凝集，再用单价群诊断血清（福氏志贺菌多价诊断血清、宋内氏志贺菌单价诊断血清）行凝集反应定群。 血清学试验结果判断： 血清凝集试验阳性：出现肉眼可见凝集颗粒 血清凝集试验阴性：液体呈乳状悬液 ; KIA 标本号;标本号;;实验讨论： 作业： 1、查5篇关于粪便标本检验常见病原菌文献，例出文献名及每篇文献中前五种常见菌。 2、写出粪便标本中金黄色葡萄球菌检验的检验程序及分离培养基。