一种快速鉴定猪肺炎支原体免疫显性蛋白抗原的ELISA-微生物学报.PDF

44 生 物 工 程 学 报 周瑶琴 等/一种快速鉴定猪肺炎支原体免疫显性蛋白抗原的ELISA 方法的建立 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jan. 25, 2018, 34(1): 44−53 DOI: 10.13345/j.cjb.170220 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·动物及兽医生物技术· ELISA 周瑶琴，游凤，钟杰，王豪举，丁红雷 400715 , , , . ELISA . , 2018, 34(1): 44–53. Zhou YQ, You F, Zhong J, et al. Development of an ELISA for identification of immunodominant protein antigens of Mycoplasma hyopneumoniae. Chin J Biotech, 2018, 34(1): 44–53. 摘 要: 旨在建立一种快速鉴定猪肺炎支原体 (Mycoplasma hyopneumoniae ，Mhp) 血清体液免疫显性蛋白抗原 的方法。通过构建pGEX-6P-1-mhp366 重组表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3) ，将GST-Mhp366 重组蛋白进行 原核表达。将 GST-Mhp366 重组菌和 GST 工程菌裂解液加入谷胱甘肽包被板进行抗原包被，分别与 17 份 Mhp 阳性血清和13 份Mhp 阴性血清反应，通过对抗原包被量、封闭液、血清和二抗稀释度的优化，确定间接ELISA 的反应条件。最终确定GST-Mhp366 重组菌和GST 工程菌裂解液原液为抗原的最佳包被量，PBS+10% FBS+2.5% 脱脂奶粉为最佳封闭液，分别将血清按照 1 ∶500 稀释、酶标二抗按照 1 ∶40 000 稀释作为最佳工作浓度，从而 建立了一种基于间接ELISA 的快速鉴定Mhp 血清体液免疫显性蛋白抗原的方法，同时通过已知的血清体液免疫 显性蛋白Mhp156 和Mhp364 对所建立的方法进行了验证。该方法的建立能够用于在基因组水平高通量筛选Mhp 血清体液免疫显性蛋白抗原，并为Mhp 初乳体液免疫和黏膜免疫显性蛋白抗原鉴定方法的建立奠定基础。 : 猪支原体肺炎，Mhp366 ，免疫显性蛋白抗原，酶联免疫吸附试验 Received: May 31, 2017; Accepted: November 16, 2017 Supported by: Fundamental Research Funds for the Central Universities (No. XDJK2017D034), Chongqing Special Project of Social Livelihood Science and Technology Innovation (No. cstc2015shmszx 80033). Corresponding author: Honglei Ding. Tel: +86-23 E-mail: hongleiding@ (No. XDJK2017D034) (No. cstc2015shmszx80033) 2017-11-28 /kcms/detail/11.1998.Q1049.002.html 周