人 体解剖与组织胚胎学专业优秀论文 辛伐他汀对tribbles在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中表达的影响.DOC

经典文档 下载后可编辑复制 人体解剖与组织胚胎学专业优秀论文 辛伐他汀对Tribbles在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中表达的影响 关键词：辛伐他汀 人脐静脉内皮细胞 脂多糖 Tribbles mRNA表达 摘要：目的： 1999年ROSS提出动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病，它的形成是血管内皮细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞与炎症介质相互作用的结果，以粥样斑块中出现单核细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞为特征。血管内皮细胞在动脉粥样硬化的发生发展过程中具有重要作用。血管内皮细胞直接接触血液，血液中的异常物质可直接影响内皮细胞，如ox-LDL等。血管内皮细胞受到刺激后，可分泌多种细胞因子，促进白细胞粘附、血管平滑肌细胞增殖及迁移等。 Tribbles是在果蝇体内发现一种抑制有丝分裂的蛋白激酶，也称为神经细胞死亡诱导蛋白激酶（SINK）。在哺乳动物体内有三种TRBs基因家族成员：TrbI，Trb2，Trb3。Tribbles蛋白拥有一个相同的中心区，以及70-100个氨基酸残基的氮末端和25个残基的碳末端区。此中心区是一个类似丝氨酸--苏氨酸蛋白激酶，但缺乏赖氨酸活性位点的区域，因而具有激酶活性调控作用，可调节MAPK上游MAPKK的表达，从而调节MAPK的磷酸化，而MAPK可与转录因子NF-κ B和AP-1等的表达有关。 脂多糖为经典的炎症刺激物，是实验中最常用的炎症刺激因子。脂多糖可激活内皮细胞，促使NO、氧自由基、趋化因子、细胞因子、前列腺素等的表达，这些炎症因子通过自分泌或旁分泌等途径促使细胞损伤，内皮细胞间隙增大，血管基膜暴露，中性粒细胞和单核细胞等迁移内皮下，致使损伤加剧。脂多糖可通过TLR-4激活血管内皮细胞中MAPKs及NF-κ B等信号传导途径。 他汀类（statins）药物属于3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMG-CoA）抑制剂，可以降低血清胆固醇的含量，是治疗动脉粥样硬化的常用药。越来越多的研究表明，他汀类药物不仅具有降脂作用，还具有抗炎作用，其抗炎作用主要通过抑制NF-κ B途径实现。 本实验应用脂多糖作为炎症刺激物，辛伐他汀作为保护药物，观察Tribbles在脂多糖激活的人脐静脉内皮细胞中的mRNA表达变化以及辛伐他汀对其表达的影响。 方法： 1.细胞培养：取新鲜脐带，分离人脐静脉内皮细胞，培养，鉴定，传代，第2-3代的细胞用来实验。 2.细胞分组：将细胞随机分成12h、24h两组，每组又分为：①对照组；②脂多糖组（100ng/mL）：③辛伐他汀组（5μg/mL）；④脂多糖与辛伐他汀共作用组。吸去细胞上清液后将细胞冻存在-80℃留做荧光实时定量PCR检测。 3.收集细胞，分别抽取mRNA，反转录cDNA，进行荧光实时定量PCR检测IL-6、TNF-α、Trb1、Trb2及Trb3的mRNA表达，记录结果。 4.上述实验重复6次，并用统计学分析软件进行统计分析。 结果： 1.人脐静脉内皮细胞鉴定结果：形态学鉴定，相差显微镜下，内皮细胞分布均匀，单层生长，形态为多角形，鹅卵石状镶嵌排列；内皮细胞Ⅷ因子相关抗原SABC法检测鉴定，相差显微镜下，内皮细胞胞浆中可见棕黄色颗粒，鉴定结果为人脐静脉内皮细胞。 2.实时定量PCR结果：与对照组相比，脂多糖组IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达明显增强（Pamp;gt;0.05）；与脂多糖组相比，脂多糖与辛伐他汀共作用组IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达明显减少（Pamp;lt;0.05）。 结论： 1.脂多糖可以诱导人脐静脉内皮细胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达增加。 2.辛伐他汀可以抑制由脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表达。 3.Trb1及Trb3可促进脂多糖刺激的HUVEC的凋亡。 正文内容 目的： 1999年ROSS提出动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病，它的形成是血管内皮细胞、单核细胞、血管平滑肌细胞与炎症介质相互作用的结果，以粥样斑块中出现单核细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞为特征。血管内皮细胞在动脉粥样硬化的发生发展过程中具有重要作用。血管内皮细胞直接接触血液，血液中的异常物质可直接影响内皮细胞，如ox-LDL等。血管内皮细胞受到刺激后，可分泌多种细胞因子，促进白细胞粘附、血管平滑肌细胞增殖及迁移等。 Tribbles是在果蝇体内发现一种抑制有丝分裂的蛋白激酶，也称为神经细胞死亡诱导蛋白激酶（SINK）。在哺乳动物体内有三种TRBs基因家族成员：TrbI，Trb2，Trb3。Tribbles蛋白拥有一个相同的中心区，以及70-100个氨基酸残基的氮末端和25个残基的碳末端