葡萄糖氧化酶的有机相共价固定化-微生物学报.PDF

476 周涛 等/葡萄糖氧化酶的有机相共价固定化 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology April 25, 2012, 28(4): 476−487 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 研究报告 1,2 1 1 1,2 1 周涛 ，朱雄军 ，苏建华 ，姚冬生 ，刘大岭 1 暨南大学生命科学技术学院微生物技术研究所，广东 广州 510632 2 广东省生物工程药物重点实验室，广东 广州 510632 周涛, 朱雄军, 苏建华, 等. 葡萄糖氧化酶的有机相共价固定化. 生物工程学报, 2012, 28(4): 476−487. Zhou T, Zhu XJ, Su JH, et al. Covalent immobilization of glucose oxidase within organic media. Chin J Biotech, 2012, 28(4): 476−487. 摘 要: 将葡萄糖氧化酶 (GOD) 在最适pH 条件下冻干后，以戊二醛活化的壳聚糖为载体，分别在传统水相 和 1,4-二氧六环、乙醚、乙醇三种不同的有机相中进行共价固定化。通过比较水相固定化酶和有机相固定化酶 的酶比活力、酶学性质及酶动力学参数，考察酶在有机相中的刚性特质对酶在共价固定化过程中保持酶活力的 影响。结果表明，戊二醛浓度为0.1 ％、加酶量为80 mg/1 g 载体、含水 1.6 ％的1,4-二氧六环有机相固定化GOD 与水相共价固定化GOD 相比，酶比活力提高2.9 倍，有效酶活回收率提高3 倍；在连续使用7 次后，1,4-二氧 六环有机相固定化GOD 的酶活力仍为相应水相固定化酶的3 倍。在酶动力学参数方面，不论是表观米氏常数， 最大反应速度还是转换数，1,4-二氧六环有机相固定化的 GOD (K app=5.63 mmol/L ，V =1.70 μmol/(min·mg m max GOD) ，K =0.304 s-1) 都优于水相共价固定化 GOD (K app=7.33 mmol/L ，V =1.02 μmol/(min·mg GOD) ， cat m max Kcat=0.221 s-1) 。因此，相比于传统水相，GOD 在合适的有机相中进行共价固定化可以获得具有更高酶活力和更 优催化性质的固定化酶。该发现可能为酶蛋白在共价固定化时因构象改变而丢失生物活性的问题提供解决途径。 关键词: 葡萄糖氧化酶，共价固定化，有机介质，酶比活 Covalent immobilization of glucose oxidase within organic media 1,2 1 1 1,2 1 Tao Zhou , Xiongjun Zhu , Jianhua Su