2015版中国药典-药品微生物检查.ppt

2.2.2?控制菌检查用培养基的适用性检查 控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 耐胆盐革兰氏阴性菌 【15版：新增】 肠道菌增菌液体培养基 促生长能力 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 促生长能力+指示特性 大肠埃希菌 大肠埃希菌 麦康凯液体培养基 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 麦康凯琼脂培养基 促生长能力+指示特性 大肠埃希菌 【10版：大肠菌群】 乳糖胆盐发酵培养基　　 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 乳糖发酵培养基 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 表1控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力及指示特性 二、非无菌产品微生物限度检查 * 液体培养基促生长能力检查? 分别接种不大于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不长于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 固体培养基促生长能力检查? 用涂布法分别接种不大于100cfu 【10版：50~100cfu】的试验菌于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不长于规定的最短培养时间下培养，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。 二、非无菌产品微生物限度检查 * 培养基抑制能力检查? 接种不少于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不短于规定的最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。 培养基指示特性检查? 用涂布法分别接种不大于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不长于规定的最短培养时间下培养，被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。 二、非无菌产品微生物限度检查 * 2.2.3控制菌检查方法适用性试验 试验菌? 根据各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应试验菌株，确认耐胆盐革兰阴性菌检查方法时,采用大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为试验菌。 结果判断? 上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查；若未检出试验菌，应消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法适用性试验。 如果经过试验确证供试品对试验菌的抗菌作用无法消除，可认为受抑制的微生物不可能存在于该供试品中，选择抑菌成份消除相对彻底的方法进行供试品的检查。 二、非无菌产品微生物限度检查 * 2.3供试品检查 供试品的控制菌检查应按经方法适用性试验确认的方法进行。 供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。 阳性对照试验? 阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查,对照菌的加量应不大于100cfu。阳性对照试验应检出相应的控制菌。 阴性对照试验? 以稀释剂代替供试液照相应控制菌检查法检查，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 二、非无菌产品微生物限度检查 * 控制菌检查过程： 使用无选择性增菌培养基（胰酪大豆胨液体培养基）培养，使受损的细菌得到修复，提高检出率。 增菌培养----选择性增菌----选择性琼脂 二、非无菌产品微生物限度检查 2.3供试品检查 * 2.3.1耐胆盐革兰阴性菌【10版：大肠菌群】 2.3.2大肠埃希菌 2.3.3沙门菌 2.3.4铜绿假单胞菌 2.3.5金黄色葡萄球菌 2.3.6梭菌 2.3.7白色念珠菌 二、非无菌产品微生物限度检查 2.3供试品检查 * 2.3.1耐胆盐革兰阴性菌【15版新增】 供试液制备和预培养? 取供试品，用胰酪大豆胨液体作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法” （通则1105）制成1：10 供试液，混匀，在20～25℃培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2 小时）。 定性试验 除另有规定外，取相当于1g 或1mL 供试品的上述预培养物接种至肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48 小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24 小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。 二、非无菌产品微生物限度检查 * 2.3.1耐胆盐革兰阴性菌【15版新增】 定量试验 选择和分离培养 取相当于0.1g、0.01g 和0.001g（或0.1mL、0.01mL 和0.001mL）供试品的预培养物或其稀释液分别接种至肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48 小时。上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24 小时。 结果判断? 若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落