脂质体介导的鲫CAB细胞转化及转化细胞的核移植-中国科学院水生.PDFVIP

维普资讯 第 25卷第 5期 水 产 学 报 Vol25，No5 2001年 10月 JOURNALOF 同Sl证 砸sFO CHINA Oct．2∞1 文章编号 ：1000—0615(2001)05—0402—06 脂质体介导的鲫 CAB细胞转化 及转化细胞的核移植 赵浩斌．朱作言 (中国科学院水生生 用f究所淡水生态与生物技术国家重点实验室．湖北 武汉 430072) 摘要：采用脂质体法成功地使 基因转^鲫囊胚细胞株CAB细胞基因组，获得了具有P-~I8抗性的细胞。 以转化细胞为供体，银鲫卵为受体 核移植得到了转基因的囊胚和原肠胚；并发现4℃处理细胞 24h能显著改 善棱移植胚胎的发育 关键词：鲫；转化；核移植；转基因鱼；脂质体介导 中国分类号：。813；$917 文献标识码 ：A LipofectionofcellsofCAB strainofCarassiusauratus andnucleartransplantation oftransformed cells ZHAO Ha0·bni ．刃舳 Zuo—yah ( 协 咖 Freshu~ Ecoo／~,andBiotechnoo／gy，lna／~eof毋 ：舶 ， ，Wuhan 430072，Chma) Abs眦 ：The genecoratnletswe successfuayintroducedintocellsofCABstI~illofcruciancarp(Carass；~ n )bylipor r0n，andthecellswithantagonism toG418weTgobtained．Transgenicfishembryosat blastulaandgastmiastagewefeacquired缸 g／borhGHWaasformcdcellsbynucleartransferusingeggsof silvercruciancarp (ChrassiusⅡ“m k如 Bloch)aSrecipients，andthedevelopn~ tofnucleartransfer embi~oswasbetterfrom cellsincubatedat4℃ for24hthanthatfrom freshlyrneparde cells．Theresultsindicated thattransgcnicfihswithstableintegratedfore~ genemightbegotvianucleartransferoftransfomaedcells，and theefficiencyoffiucleartransfercouldbeaffectedbySt．attlsofdOllroceils． Keywords：CarassiasⅡⅡmf ：Wansfommlion；nucleartransplantation；trans~nicfish；lipofecdon 细胞的基因转移是研究基因功能、基因表达和基因调控的主要手段，也是转基因动物研究的主要途 径 ，培养细胞的基因转化、筛选及克隆是核移植方法纯合转基 因鱼的前提 。细胞基因转移的方法有脂质 体介导、重组缺陷性病毒感染、显微注射 电脉冲介导、磷酸钙共沉淀法和Polybrene介导等多种途径 。 培养细胞基因转移的研究在哺乳动物进行得 比较广泛，而鱼类细胞基因转移的研究较少，有一些学者进 行了探索，沈孝宙等1]J和李金花等 J用 DNA-磷酸钙共沉淀法分别使 ixSV2一CAT质粒和DsV2。n。o质粒 导人草鱼肾细胞株CIK，李辉等 和张义兵 。分别用 Polybrene介导进行 r鱼类细胞的人生长激素 ( H)基 因转移 ，Zhang