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小鼠及蛙类基本实验技术Basic Experimental Technique of Mouse and Frog 医学基础实验教学中心 洪天国 2012年5月 小鼠及蛙类基本实验技术 一、实验目的 学习并掌握小鼠捉拿和各种给药方法 腹腔注射，灌胃给药 Intraperitoneal Injection and Intragastric Administration 学习并掌握蛙类捉拿及常用实验技术 坐骨神经干腓肠肌标本制备，坐骨神经干分离 Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen Free of Sciatic Nerve 熟悉机能实验室动物实验规章制度 动物领取，动物处理 Animal Collection and Burial 二、实验材料与动物 试剂 （Agent） 0.9%NaCl溶液（生理盐水），任氏液（Ringer’s） 器材 （Equiment） 1ml注射器，小鼠灌胃器，蛙类基本手术器械（包括粗剪刀、眼科剪、组织镊、刺蛙针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板等），图钉，玻璃平皿，手术线，纱布等。 动物 （Animal） 小鼠（每组2只），蟾蜍（每组2只） 2.小鼠腹腔注射 （Intraperitoneal Injection） 左手固定小鼠，使腹部朝上，右手持注射器，取45°角刺入左侧下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏，推注前应回抽确认。 注射量一般为0.1～0.2 ml/10g体重。 3.小鼠灌胃 （Intragastric Administration） 三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备 左手握蟾蜍，食指下压吻端，拇指按压背部，其余三指紧贴腹部。找到枕骨大孔刺入1-2mm，分别捣损脑组织和脊髓。 ※脑和脊髓完全破坏的标志是：呼吸停止，四肢松软并处于对称位置。  三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备 在骶髂关节水平上1cm处剪断脊柱，去除头、前肢和内脏，保留部分脊柱和下肢。用任氏液小心冲洗坐骨神经及其周围组织上的血液。 3.剥皮 （Skinning） 剪去尾骨,剥去余下组织的皮肤,沿脊柱正中到耻骨联合将标本剪开,标本放到盛有任氏液的烧杯中。 4.游离坐骨神经 （Free of Sciatic Nerve） 腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎。 5.制成坐骨神经—腓肠肌标本 （Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen） 腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎。 6.标本检验 (Specimen Examination) 用锌铜弓（任氏液预先湿润）轻轻刺激坐骨神经，腓肠肌收缩即表示标本制备完好。 四、注意事项 捉拿小鼠时应规范操作，避免被咬。 腹腔注射时，针头刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺破内脏。针头与腹腔的角度不宜太小，避免刺入皮下。 灌胃时，针头沿鼠口角通过食管进入胃内。灌时如很通畅，则表示针头已进入胃内；如动物有呕吐或强烈挣扎，必须拔出后按上述方法重新操作。如进针不顺，决不可硬向里插。 抓取蟾蜍时，小心毒液。 抓取蟾蜍时，小心毒液。 分离神经时，应用玻璃分针。 保持坐骨神经腓肠肌标本活性（加任氏液、不要用手和器械夹捏）。 机能实验室动物实验规章制度 动物领取：实验开始后，按规定数量在动物房领取，领完动物后及时关闭鼠笼或蛙笼。实验过程中非操作因素导致动物死亡，须经主讲老师批准后方可重新领取，严禁擅自拿取。 动物实验：应爱惜实验动物，严禁浪费。 动物尸体处理：实验完毕后，动物尸体集中于回收桶，由值日同学负责处理。 * * 实验目的 Purpose 一 实验材料 Material 二 实验方法 Method 三 注意要点 Precaution 四 1.小鼠捉拿 （Mice Seizure） 1）双手捉拿方法 三、实验方法：小鼠实验技术 右手抓尾后拉，左手拇指和食指抓住小鼠头颈部皮肤，将其固定于左手大鱼际处； 拉直四肢并用左手无名指、小指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其它实验操作。 2)单 手 捉 拿 方 法 3 1 2 4 三、实验方法：小鼠实验技术 1 小 白 鼠 1 灌胃量一般为 0.1～0.3ml/10g体重。 2 以左手捉持小鼠，使头