血沉测定、HCT测定及贫血分类、是Ret计数.ppt

1 根据MCV、MCH、MCHC对贫血分类 类型 MCV(fl) MCH(pg) MCHC (%) 病因 大细胞性贫血 100 34 32-36 巨幼贫等 正常细胞性贫血 80-100 27-34 32-36 急性失血等 小细胞低色素性 80 26 32 缺铁贫等 贫血 单纯小细胞性 80 26 32-36 慢性感染、 贫血 中毒等 三、网织红细胞计数 一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。 计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或×红细胞计数结果报告其绝对值。 网织红细胞（Ret） 网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。 分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型） 计数方法 1、普通光学显微镜法： 活体染色后推片镜检 2、网织细胞计数仪法： 荧光染色后用流式细胞术计数 二、试剂器材 1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘 三、操作步骤 1. 染色： 玻片法于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然晾干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合； 试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间； 2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜； 3. 低倍镜浏览：选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野RBC总数1000为止）。 四、计算 1.Miller窥盘法：网织红细胞（Ret）百分率(%)= （大方格内Ret总数）/（小方格内RBC总数×9）×100% 2.直接计数法：网织红细胞（Ret）百分率(%)= 多个视野内Ret总数/多个视野内RBC总数×100% 五、注意事项 1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。 2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发。 3.染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。 4.涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数 5.试剂应定期重配，以免变质沉淀。 六、参考值 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） 成人绝对值（24-84） ?109/L 七、临床意义 　 Miller窥盘 A 3 1 B 将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。 * * * * 实 验 四 一、血沉测定 二、HCT测定及贫血分类 三、Ret计数 *四、红细胞平均直径测定 一、血沉测定 概念 红细胞沉降率简称血沉（ESR），指在规定的条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。 血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的